上篇《兽医随笔：实验动物采血指南》中，我们主要从循环血量、采血量和采血点3个方面，提出作者的一些观点及建议。

然而，考虑到实验动物采血操作是试验中常见的操作，而且对动物的健康和福利会造成直接的影响，还有很多关于采血的细节和注意事项需要我们予以关注。

一般的参考文献都是针对健康的、青年动物。如果动物有健康问题，或者试验因素影响动物健康状况，可能加剧血液流失的健康隐患，导致动物不能快速恢复。

科学的采血指导主要目的是降低对动物的疼痛和痛苦，最大程度维护动物福利；同时，也为了能够科学的开展试验，提供可靠的、可重复的高质量科学数据。

为了实现这些目标，我们在决定采血最大容量和频率的时候，对于不同动物种属项目及不同的机构需要关注的细节很多，并尽可能降低采血操作对动物健康和福利的影响，以及确保试验数据的科学和完整性。

01 动物福利监管

大多数的指导原则都明确的指出，如果试验方案要求超出了建议的采血最大限值或不能给与充分的恢复时间，方案需要获得实验动物伦理委员会（IACUC）的批准。监管机构为了确保动物的福利，需要定期的监控其监督流程的有效性（批准后监督/PAM），并根据需要采取额外的监督措施。

02 主治兽医的职责

主治兽医应该在方案设计、项目实施和数据解读过程中，提供专业的指导建议。提供专业指导的兽医，特别是熟悉病理方面的专家，可以结合临床症状或血液学异常数据，来分析这些异常与血液采集操作的相关性。

03 血液流失

在血容量的计算过程中，需要考虑“意外的”血液流失，比如实际的采血量超过计划血量、血液渗漏到采集容器的外面、留置导管中的血液未回到动物体内、或止血过程中导致血液流失（如动物凝血功能异常或从动脉进行采血）。

04 保定

为了确保动物和操作人员安全，以及降低动物的疼痛和应激，我们需要在采血过程中，对动物进行合适的驯化、保定、镇静或麻醉。在选择保定方法（物理、化学或二者同时使用）时，必须考虑动物的种属、试验的需求、有或无保定系统/设备和人员的经验。应尽可能，在使用保定设备前，对动物实施一定的适应性操作。保定流程导致的不适和化学药物的作用可能改变血细胞数量和/或血清或血浆的分析。这些潜在的试验变量必须在试验设计时进行考虑。 

05 采集部位准备

采血前我们必须关注采血部位的准备工作。采集无菌血样时需要实施无菌采集技术，比如：剃毛后，在下针前，需要对采集部位进行彻底的消毒。当需要植入短期的血管导管，或长期留置在体内的导管和/或接入端口，在实施植入操作的时候必须进行无菌操作，后期在对留置导管和端口进行操作时，应避免植入相关的感染和/或败血症，避免对动物的健康和福利造成影响，以及对试验数据的解释造成影响。

06 试验方案准备

如果试验中需要实施血样采集，我们需要在方案申请中注明如下信息：采血的科学目的、采血方案细节（血样类型、采集频率、采集部位、单次采血量、一定时间内采血总量、终末采血等）、采集前是否需要禁食、动物品种品系年龄性别体重和健康状况、是否需要补充血容量（全血、液体或血容量扩充剂）、是否需要麻醉或特殊保定、是否考虑微量采血技术、人员的培训等等。

07 毒代动力学或药效学试验的特殊考虑

在这些项目中，血液学和血生化检查不是分析的重点项目，如需采集超过限值的血量需要获得IACUC的批准。此外，啮齿类动物的血样采集，如在安乐死前几小时实施超大量的血液采集，即使这些操作不会导致动物表现临床症状或影响后续的组织病理学检查，也需要获得IACUC的批准。

08 动物健康监控

我们制定采血指南的目的，是避免在采样过程中发生动物不良反应或其他健康状态。在短期内采集大量的血液或长期对动物进行重复血样采集，可能会导致这些不良反应（见表1）。在血样采集过程中，我们试验人员或兽医人员需要密切关注动物的健康状况，根据动物状况提供及时的兽医护理。

参考文献：

1. Guide for The Care and Use of Laboratory Animals, 8th edition.

2. Guidelines for Blood Collection for Common Laboratory Animals, IQ 3Rs Leadership Group-Contract Research Organization Working Group, 2016.