六种核酸提取试剂盒对粪样中小鼠肝炎病毒核酸 提取效率的比较
目的 比较六种商品化试剂盒在小鼠粪便中提取小鼠肝炎病毒(MHV)RNA的效率,筛选出效率高、耗时短的核酸提取方法。
方法 采集感染 MHV小鼠的新鲜粪便样本,分别用液氮研磨法、磁珠匀浆法以及PBS溶解离心法进行处理,通过同一核酸提取试剂盒比较病毒核酸提取效率,明确最佳样本前处理方法;之后,用6种试剂盒进行RNA提取,经反转录后进行TaqMan实时定量 PCR检测,以Ct值评价6种试剂盒的提取效率,结合产物测序和血清抗体ELISA结果,筛选MHV的最佳核酸提取方法。
结果 对于粪便样本的前处理,液氮研磨法的RNA提取效率显著高于磁珠匀浆法。对于6种试剂盒的提取效果,TIANGEN DP422【总RNA浓度∶(549.70±52.38)ng/μL,Ct值∶(24.51±0.10)】核酸提取效率最高;TIANCEN SD101【总RNA浓度∶(274.13±6.87)ng/μL,Ct值∶(2.39±0.017)】和QIAGEN 52904【总RNA浓度∶(288.13±15.11)ng/μL,Ct值∶((2.40±0.012)】用时最短;XS VRL【总RNA浓度∶(348.80±15.85)ng/μL,Ct值∶(24.70±0.13)】操作最为方便。
结论 粪便样本前处理建议采用液氮研磨法。针对粪便中MHV RNA的提取,TIANGEN DP422提取效率最高,推荐用于小鼠肝炎病毒的分子生物学检测。
阅读原文:六种核酸提取试剂盒对粪样中小鼠肝炎病毒核酸 提取效率的比较.pdf
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