高效液相色谱（High Performance Liquid Chromatography, HPLC）又叫高压、高速、近代液相色谱，通常叫做高效液相色谱。它是60年代中期才建立的一种高效快速分离化合物的方法，到了70年代后期才广泛用于蛋白质的分离纯化方面，现已成为分离纯化蛋白质非常有效的方法之一。
和经典常压色谱相比有以下特点：
1、HPLC分离、纯化蛋白质的速度快。通常半小时左右可进行一次，大大缩短了纯化蛋白质的时间；
2、分辩率高。一根长10cm的色谱柱可分离十几种以上的物质；
3、适应面广，灵活性强，几乎所有的蛋白质根据它们的性质差别（等电点、疏水性、分子量、电荷分布等）都可以用不同HPLC方法进行分离提纯；
4、灵敏度高。HPLC现已广泛采用多种高灵敏度的检测器，如紫外、荧光、电导等。荧光的灵敏度可达10-9g；
5、重复性好，在作分析蛋白质分析试验时，误差一般不超过5%。
因此，HPLC在蛋白质分离纯化方面具有极其重要的位置。当然HPLC也有它的缺点，例如，仪器设备价格昂贵，虽然已有制备柱使用，但制备量还是受到限制，在某些方法中，由于使用有机溶剂，对蛋白质的活性会有一定影响。高效液相色谱仪是高效液相色谱的专用仪器，有很多种类，从类型看分为综合型高效液相色谱仪和专用型仪器，从功能上分为分析型、制备型、分析和制备兼用型。 
高效液相色谱(High Performance Liquid Chromatography，HPLC)的主要优点是： 
1、分辩率高于其它色谱法 
2、速度快，十几分钟到几十分钟可完成
3、重复性高；
4、高效相色谱柱可反复使用； 
5、自动化操作，分析精确度高 根据分离过程中溶质分子与固定相相互作用的差别，高效液相色谱可分 四 基本类型，即液－固色谱、液－液色谱、离子交换色谱和体积排阻色谱。
高效液相色谱在生物领域中广泛用于下列产物的分离和鉴定： ⑴氨基酸及其衍生物； ⑵有机酸； ⑶甾体化合物； ⑷生物硷；⑸抗菌素； ⑹糖类；⑺卟啉； ⑻核酸及其降解产物； ⑼蛋白质、酶和肽；⑽脂类等。