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实验猴常见胃肠道寄生虫感染
在非人灵长类动物(NHP)中,寄生虫感染是非常普遍的。在各实验猴养殖单位对动物质量控制非常重视和多年坚持检测和治疗的前提下,过去较长的一段时期内,寄生虫感染率呈现逐年下降趋势。
但是近两年,随着各种来源的动物进入市场,寄生虫感染又有反弹趋势,例如本号前文报道的疟原虫感染率(猴源疟疾,不容小觑)上升就充分说明了这一情况。
回顾历史数据,寄生虫超高的感染率提醒我们,一旦放松警惕,它们就可能卷土重来,对实验动物健康和质量造成严重威胁。
历史数据
1989年王礼德等人对我国南方六省的590只恒河猴进行了寄生虫检测,结果只有12.2%的动物是未见感染,其余近88%的动物至少有一种寄生虫的感染。
2011年,林开铅等人对108只来自福建非人灵长类实验动物中心猕猴进行寄生虫检测,结果显示,肠道寄生虫的总感染率达49.1%。
2013年,李健等人报道了广西地区六家实验猴驯繁场的784份样本中有高达72.4%样本中存在寄生虫感染。
通常情况下,大多数实验猴感染寄生虫后没有明显临床症状,但少部分感染严重的动物会出现不同的临床表现。因此,寄生虫往往是以隐秘和持久的方式损害宿主的健康,影响研究数据的准确性。特别是那些生活史简单无需中间宿主的原虫、土源性线虫等更容易在动物群体内反复感染,成为了常见和难以去除的胃肠道寄生虫。
接下来,本文将介绍几种非常常见的胃肠道寄生虫。
01 鞭毛虫
鞭毛虫种类繁多,其中被认为对NHP具有致病性的仅贾第鞭毛虫(Giardia intestinalis)和活动三毛滴虫(Tritrichomonas mobilensis)。贾第虫在世界各地都有发现,是人类、恒河猴、食蟹猴、黑猩猩和其他动物小肠中的常见原虫。活动三毛滴虫对NHP的致病性仅在松鼠猴中有记载,本文将不作介绍。
贾第鞭毛虫有滋养体和包囊两种形态,其中滋养体长9-21um,宽5-15um, 如同纵切的半个梨子,虫体左右对称,有四对鞭毛,摆动可使虫体作迅速翻转运动或左右摇摆。包囊为椭圆形,长8-12um,宽7-10um,未成熟的包囊有两个核,成熟后有四个核。贾第鞭毛虫包囊在环境中有较强的抗性,可用2-5%的苯酚或甲酚作为消毒剂破坏包囊,加热和干燥也有同样效果。
贾第鞭毛虫滋养体
贾第鞭毛虫感染NHP后导致动物发病已有多次报道,主要症状为腹泻和呕吐。但是也有大量数据表明,大多数动物感染后并不表现明显的临床症状,导致其致病性强弱差异的原因尚不清楚。
诊断贾第鞭毛虫感染可以通过直接取粪便涂片镜检发现其特征性的贾第虫滋养体和/或包囊得到确认。然而由于贾第鞭毛虫的致病性是不确定的,在腹泻动物粪便中发现贾第鞭毛虫也不能就认定该虫就是动物致病病原体,因此还需要对动物的临床症状进行严格评估,需要进行细菌培养和相关病毒检测才能确认病因。
此外通过针对性用药和用药效果评估也能反推是否为贾第鞭毛虫感染导致动物出现症状。
对该病原的预防措施主要是要制定和遵守严格的卫生规范。由于贾第鞭毛虫是一种人兽共患病原,不论是从动物传染给人还是由人传染给动物都是可能发生的,因此饲养和护理人员也应该遵循良好的卫生习惯,使用手套、口罩、工作服等个人防护装置。也要妥善处理动物排泄物,防止其污染清洁水源,切断粪口传播的可能。
其他肠道寄生虫病的诊断和预防大多也与以上两点意见一致。
02 阿米巴
在NHP中观察到的阿米巴至少有16种之多,其中大多数都是无致病性的,仅双阿米巴可能有致病性,溶组织内阿米巴(E.histolytica)会引起动物严重肠道疾病,本文仅介绍后者。
溶组织内阿米巴也是在世界范围内都有广泛分布的,在新世界猴、旧世界猴和猿类中都有报道,其中旧世界猴的幼猴和新世界猴感染后会遭受更严重的损害,很多情况下,动物也可呈现无症状感染状态。
成熟的溶组织内阿米巴包囊有四个核,可以与其他阿米巴区分开来。而溶组织内阿米巴也分为致病性和和非致病性阿米巴(E. dispar)两种,可以通过以下方法加以区分:致病的溶组织内阿米巴的滋养体较大,直径约20-30um,非致病性阿米巴滋养体直径约12-15um;只有致病性溶组织内阿米巴才会摄取红细胞,因而滋养体内的红细胞可以帮助判断;此外,间接血凝试验、ELISA等血清学方法和PCR方法也可以作为区分的技术手段。因为溶组织内阿米巴具有间歇性排出的特征,因此要至少进行连续三次粪便检测才可确认。
溶组织内阿米巴侵入粘膜时才具有致病性,可导致动物出现嗜睡、虚弱、脱水、体重减轻、厌食、呕吐、严重腹泻,也有出现白内障的报道。尸检可见轻度到重度的坏死溃疡性结肠炎。组织学上可见结肠粘膜坏死,呈典型的烧杯状溃疡,溃疡内或附近可见滋养体。也有少量文献报道了肝脏、肺或中枢神经系统出现阿米巴脓肿。
和鞭毛虫一样,阿米巴也是一种人兽共患病,所应采取的预防措施也基本相似。环境中的包囊在潮湿条件下可存活并保持感染性数日至一个月,而在干燥条件下易死亡,且不耐热,温度高于50℃很快死亡。
03 隐孢子虫
隐孢子虫(Cryptosporidium)分布广泛,世界范围内都有报道,该属成员已被证明可引起包括人类和非人灵长类在内的多种动物的肠胃炎和腹泻。
该寄生虫通过粪便排出成熟的卵囊(Oocyst),排出后即有感染性,被吞食后在消化液的作用下子孢子逸出并侵入肠上皮细胞,发育为滋养体。卵囊对干燥有一定抗性,对化学消毒剂有高度抗性,并可以在水中存活数月。
据多篇文献报道,在恒河猴、食蟹猴、狨猴消化道中均有发现隐孢子虫,并导致动物出现不同程度的临床症状和病理表现,低龄NHP感染后更可能发展为严重的疾病。隐孢子虫的存在还会令肠上皮细胞的超微结构发生改变,这可能导致动物出现吸收不良、持续腹泻、脱水等症状。隐孢子虫更易作为机会病原体存在于逆转录病毒感染或使用免疫抑制剂而处于免疫抑制的动物个体中。
用于鉴定隐孢子虫的实验室技术包括粪便涂片抗酸染色、荧光金胺O染色法、吉姆萨染色法、碘染等多种方法。
尚未发现哪种药物对感染隐孢子虫的动物产生疗效,因而对感染动物应以支持性治疗为主。
04 线虫
线虫在NHP中是另一类非常普遍的肠道寄生虫,常见报道的包括食道口线虫、类圆线虫、蛲虫、钩虫等。本文仅介绍最常见的食道口线虫。
食道口线虫(Oesophagostomum),又称结节线虫,因其感染动物后出现典型的特征性的结节性病变而得名,被认为是旧大陆猴中最常见的线虫,在恒河猴、食蟹猴、狒狒、大猩猩等NHP中都有报道。感染的动物通常是无症状的,也有感染严重的动物消瘦、虚弱、腹泻甚至死亡。尸检可见肠浆膜、肠系膜等部位出现直径1-5mm的圆形结节性包囊,可呈白色或黑红色,部分形成时间短的结节中可找到活虫,形成时间长的结节呈白色,其内容物已干酪化。
结节线虫的感染可通过检测粪便中的虫卵来筛查,无法鉴别时,也可培养幼虫检查,剖检动物发现虫体和特征性的结节病包囊灶即可确诊。
对该寄生虫的主要控制方法也是严格遵守卫生规范,对新购入的NHP应在检疫期间进行粪便检查;用敏感药物治疗受感染的动物,该寄生虫已被报道可感染人类,因此应该被认为具有人兽共患的潜力。
感染结节线虫的食蟹猴的大肠
此外,小袋纤毛虫的感染在NHP中也十分普遍,更多信息可参考本公众号前期推文(小小纤毛虫,健康有影响)。对于那些需要中间宿主的寄生虫,例如丝虫、吸虫、绦虫、棘头虫等,应做好防虫害工作,防止实验动物接触到蜗牛、蟑螂、甲虫、其他节肢动物、啮齿类动物等。
参考文献:
1. Alan G. Brady , Angela A.L. Carville , Nonhuman Primates in Biomedical Research
2. 林开铅, 李志雄, 李莉莎,等. 开放环境实验猕猴肠道寄生虫感染状况调查[J]. 福建畜牧兽医, 2011, 33(006):1-4.
3. 王礼德, 吴军, 段幸生. 我国南方恒河猴(Macaca mulatta)寄生虫调查报告[J]. 动物学研究, 1989, 10(0z1):34-3
4. 李健,全琛宇等,广西地区人工驯繁猕猴、食蟹猴胃肠道寄生虫感染情况的初步调查 实验动物与比较医学,2013,279-284
5. 李学勇, 遇秀玲, 耿志贤,等. 食蟹猴食道口线虫病的诊断[C]// 2002年灵长类实验动物学术交流会论文摘要集. 2002.
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