目的    以猴-人免疫缺陷病毒(simian-human immunodeficiency virus,SHIV)gag 基因为特异性扩增靶标,建立一种快速、灵敏、特异的TaqMan实时荧光定量 PCR 法检测猴血浆、外周血单核细胞和淋巴结中的猴免疫缺陷病毒(simian immunodeficiency virus,SIV)和 SHIV。

方法    以SHIVSF162p3n gag基因为模板,用普通PCR方法扩 增出109 bp DNA 片段用于克隆构建标准品质粒pGEM􀳏 -T-SHIV gag。 通过对SHIV标准品质粒定量分析,优化反应体系,检测TaqMan实时荧光定量PCR方法的灵敏度、特异度和重复性。

结果    TaqMan实时荧光定量 PCR 法能 有效地检测出102~107copies/μL SIV/ SHIV gag基因 mRNA,线性系数为R2=0.998,slop=-3.304。 方法重复性检 测显示CV%在0.6%~1.1%之间。

结论    该TaqMan实时荧光定量PCR法具有快速、灵敏和特异性高的优点,适用于 SIV/SHIV感染猴动物模型的研究工作。

阅读原文：一种快速定量检测猴组织中SIV,SHIV的方法.pdf