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模型制备

猪囊尾蚴感染动物模型

2021年04月09日 浏览量: 评论(0) 来源:《人类疾病动物模型复制方法学》 作者:周光兴 责任编辑:yjcadmin

猪带绦虫的中间宿主是猪和野猪,狗、猫和羊也可有囊尾蚴寄生。人可被猪囊尾蚴寄生而导致囊尾蚴病或囊虫病,同时,人也是猪带绦虫的惟一终末宿主。猪囊尾蚴寄生人体所致囊尾蚴病,其危害远较成虫为大。在国内,常正山等人工感染猕猴猪囊尾蚴获得了成功;杨晓明、顾志香等分别建立了猪囊尾蚴病的小鼠动物模型。在国外,Ito A等对SCID鼠进行皮下及腹腔注射猪带绦虫六钩蚴后,发现所有的 SCD鼠均获得感染,认为SCID鼠可以作为所有绦虫中绦期的实验动物模型;Verster A等用猪囊尾蚴感染超免疫抑制金黄地鼠,可以发育到性成熟。Allan J.C等也发现金黄地鼠能感染猪带绦虫;IC.Wang等对超免疫抑制的蒙古沙鼠和叙利亚地鼠感染囊尾蚴也进行了研究。

(1)复制方法  ①虫卵收集:收集患者猪带绦虫孕节,用灭菌生理盐水洗涤3次,再用每毫升含300U青霉素G、300μg链霉素、6μg两性霉素的灭菌生理盐水浸泡洗涤3次,每次5min,纵向剪碎节片,用含抗生素的灭菌生理盐水将虫卵洗下,离心收集虫卵。②虫卵孵化:用含抗生素的生理盐水悬浮,加5ml酸性胃蛋白酶液(含1%胃蛋白酶、1%浓盐酸的生理盐水),摇匀,在37℃水浴1.5h,其间每20min轻摇几次,离心,吸去上清5.5ml后加2ml胰蛋白酶碳酸氢钠液(蒸馏水配制,1.8%NaHCO3,0.05%胰蛋白酶)和1ml猪胆汁,用力摇匀1min,45min后取出离心,去上清,加灭菌生理盐水至2ml,加0.1%中性红作为六钩蚴活检指示,所有从胚膜中溢出的六钩蚴均着色。镜下观察虫卵孵化情况,计算已激活六钩蚴的百分率,并调整虫体至10000个/ml。③动物感染:选取22~25g KM小鼠,经尾静脉注射已激活的六钩蚴1000个左右。

(2)模型特点  2个月后囊尾蚴寄生在肺脏、心脏、咬肌及腿部肌肉。虫体周围有少量嗜酸性粒细胞。可用ELISA方法检测小鼠血清中囊虫抗原或抗体,以验证感染情况。本方法建立的动物模型具有制作简单,经济实用的特点。

(3)比较医学  孕节的成熟程度、放置时间、孵化时间、孵化后六钩蚴的注射时间及宿主的生理状况可能影响感染率;不同造模动物感染的程度不同;不同的感染途径如灌胃、肌肉注射、腹腔注射和静脉注射影响囊尾蚴的寄生部位或直接影响到能否寄生。由于此造模动物是通过尾静脉注射而得以感染,与人或猪经口感染的方式不同,造成六钩蚴在体内循环的途径有差异,从而造成囊尾蚴寄生部位的差别。本模型可用于囊虫病的免疫、病理、药理、生化、诊断、治疗及基因工程疫苗等方面的研究。


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