目的    采用CRISPR/Cas9系统敲除肝癌细胞系HepG2的高迁移率蛋白 A2(HMGA2) 基因,探讨HMGA2敲除对于肝癌细胞生长、增殖、迁移以及侵袭的影响。

方法    根据GenBank数据库搜索人HMGA2序列,利用在线sgRNA设计软件针对 HMGA2的第一外显子以及第二外显子各设计一条sgRNA,构建靶向HMGA2的 sgRNA重组敲除载体sgE1和sgE2,将sgRNA载体转染细胞,通过有限稀释法筛选得到HMGA2-/-细胞株。 通过CCK8实验以及平板克隆形成实验检测HMGA2敲除对于HepG2细胞生长以及克隆形成能力的影响;采用Transwell实验检测 HMGA2 敲除对于HepG2细胞迁移与侵袭的影响。

结果    相比于野生型,HMGA2-/-细胞株的生长速率减慢,克隆形成能力(121. 83 ± 21. 68 vs 59. 50 ± 20. 68,P < 0. 01)、迁移(359. 67 ± 32. 53 vs 245. 61 ± 24. 23,P < 0. 05)与侵袭(251. 33 ± 43. 43 vs 47. 00 ± 10. 00,P < 0. 01)能力显著下降。

结论    HMGA2敲除降低了肝癌细胞HepG2的体外生存能力以及转移能力,HMGA2基因可以作为一个肝癌治疗的潜在靶点。

阅读原文：利用CRISPR,Cas9系统构建HMGA2敲除肝癌细胞株及其功能鉴定.pdf