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模型制备

损毁穹隆-海马伞通路致阿尔茨海默病模型

2021年06月04日 浏览量: 评论(0) 来源:《常用医药研究动物模型》 作者:主编 苗明三 朱飞鹏 责任编辑:yjcadmin

1.造模材料  动物:SD雄性大鼠,体重300~520g,对大鼠先进行迷宫训练,筛选出达到学会标准者进行造模;药物:2%异戊巴比妥;器械:江湾Ⅰ型C立体定位仪,电动开颅器,双刃刀。

2.造模方法  将大鼠腹麻醉后固定于江湾Ⅰ型C立体定位仪上,常规消毒、剪毛,切开头皮暴露颅骨,参照Paxinos和Watson的大鼠脑立体定位图谱,在前囟后2.2~2.5mm,中线外1mm处,用电动开颅器凿开颅骨,切开硬脑膜,用自制双刃刀(刀片宽约2mm)先置于上述部位的脑表面,接着进刀4.5mm,外移1mm,然后再降刀1mm,外移1.5mm,最后上下抽动约20次,以保证海马伞外侧缘完全切断。

3.造模原理  采用损毁穹隆一海马伞通路建立AD模型等方法,使损害侧的海马失去胆碱能支配,导致实验动物行为学及神经化学方面的缺损,造成动物空间定向和记忆障碍及胆碱能神经元丢失。

4.造模后的变化  在AD大鼠建模后第二周对所有大鼠进行第二次迷宫检查,对照组大鼠的每天出现错误反应的次数(error number, EN)、全天总反应时间(total reaction time, TRT)均达标,且与建模前无显著性差异,说明该组大学习记忆的保持及再现能力良好,而AD组大鼠EN增至(7.25±2.12)次,TRT延长至(153±32.7)s,分别较建模前差异显著,且连续训练4天仍不能达到学会标准,说明手术切断左侧穹窿—海马伞(fimbria-fomix, FF)导致了大鼠的记忆保持及学习能力均出现障碍。

5.造模后病理及生化变化  免疫组化显示:海马内胆碱乙酰转移酶(choline acetyl transferase, ChAT)活性降低,乙酰胆碱酯酶(acetylcholinesterase, AchE)阳性纤维密度减少,相应脑区胆碱能细胞显著减少,而对侧海马ChAT活性没有明显变化,切断双侧穹隆一海马伞通路造成的AD模型鼠的行为学及神经生化改变长期无法恢复。

6.注意事项  手术器械严格消毒,防止手术感染,手术创伤应尽可能小,严格无菌操作;颅骨钻孔时应注意深浅,一旦有突破感立即停止,防止引起大量出血。

术后大鼠应分开,等苏醒后3~5h才能合笼饲养,防止先醒的舔咬昏迷大鼠的伤口。饲养室内尽可能保持大鼠的最适温度、湿度。


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