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模型制备

持久性双侧颈总动脉结扎法建立血管性痴呆动物模型

2021年06月28日 浏览量: 评论(0) 来源:《常用医药研究动物模型》 作者:主编 苗明三 朱飞鹏 责任编辑:yjcadmin

1.造模材料  动物:老龄健康Wistar大鼠(月龄>16个月),雌雄不限,体重300~400g;药物:1%戊巴比妥。

2.造模方法  大鼠术前12h禁食,4h禁水。用1%戊巴比妥(10mg/kg)腹腔注射麻醉,保证手术期间有自主呼吸。仰卧固定,颈前部去毛消毒后沿颈正中切开,分离出双侧颈总动脉,双重丝线结扎,术中大鼠肛温保持在36.5~37.5℃,手术后动物送至有通风和空调设备的动物房饲养。对照组动物仅行颈前切开,不结扎颈总动脉。

3.造模原理  通过持久性双侧颈总动脉结扎致老龄大鼠慢性前脑灌注不足,建立学习记忆障碍的大鼠痴呆模型。

4.造模后一般变化  双侧颈总动脉完全阻断后首先出现短暂惊厥,体温降低,呼吸减慢,翻正反射消失;术后早期观察动物运动减少,后肢呈“八字”,走路共济失调,或爬行和转圈;术后7天试验组已基本恢复,无明显的运动障碍。

穿梭箱试验结果可以看出,与对照组比较,慢性脑灌注不足2个月及4个月后大鼠学习能力被动回避反应(passive avoidance response, PAR)均下降,4个月较2个月明显,经统计学处理差异非常显著;大鼠学习能力主动回避反应(active avoidance response,  AAR)亦下降,缺血2个月组与缺血4个月组比较相差不显著,说明缺血2个月时,大鼠学习能力已明显下降。

5.造模后生化变化  免疫组化显示:对照组海马结构CA1区、CA2区、CA3区、门区和齿状回均有大量ChAT免疫反应阳性神经元和纤维分布,其中以海马锥体细胞层和颗粒细胞层最密集;其次为海马腔隙分子层、齿状回分子层和海马门(CA4)等区域;辐射层相对较稀疏。缺血2个月组海马结构内仍有一定量ChAT免疫反应阳性神经元和纤维分布,而CA1区内ChAT免疫反应阳性神经元和纤维数量显著减少,分布稀疏;CA2区、 CA3区齿状回ChAT免疫反应阳性神经元和纤维分布基本同对照组。两组大脑皮质各层中 ChAT免疫反应阳性神经元和纤维均呈弥散分布,其中以Ⅱ、Ⅳ、Ⅴ层中较密集,Ⅰ层和Ⅵ层中仅有少量阳性神经元分布,两组间差异无显著性。海马CA1区ChAT免疫反应阳性神经元按每0.9mm2计数,对照组和缺血2月组海马CA1区ChAT免疫反应阳性神经元计数分别为:120.15±2.02、40.37±3.18,组间差异有显著性。

6.注意事项  手术器械严格消毒,防止手术感染,手术创伤应尽可能小,严格无菌操作。

术后大鼠应分开,等苏醒后3~5h才能合笼饲养,防止先醒的舔咬昏迷大鼠的伤口。饲养室内尽可能保持大鼠最适温度、湿度。


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