水貂阿留申病毒VP2基因TaqMan荧光定量PCR检测方法的建立与应用
2021年07月05日
来源:《实验动物与比较医学》2020年第4期
作者:闫文卓 陆涛峰 周洁 赵丽丽 陈洪岩
责任编辑:admin
摘要:建立一种方便、灵敏的水貂阿留申病毒(AMDV)荧光定量PCR检测方法,从而实现临床样品中AMDV的快速定量检测。
目的 建立一种方便、灵敏的水貂阿留申病毒(AMDV)荧光定量PCR检测方法,从而实现临床样品中AMDV的快速定量检测。
方法 根据 AMDV的结构蛋白VP2的基因保守区域设计一对特异性引物和探针,优化PCR反应条件,建立TaqMan实时荧光定量PCR检测方法,绘制标准曲线,并进行特异性、敏感性和稳定性分析。
结果 建立的标准曲线在1.0×102拷贝/μL至1.0×108拷贝/μL之间具有良好的线性关系,相关系数(r2)大于0.994。该方法检测的灵敏度为 102拷贝/μL,且与犬细小病毒、犬腺病毒、犬瘟热病毒和水貂病毒性肠炎病毒均无明显交叉反应,特异性良好。重复性试验结果显示,该方法的组内和组间变异系数均小于3%,重复性良好。利用该方法对417份临床组织样品进行检测的结果显示,中国部分地区的AMDV阳性率为81.5%。
结论 本研究建立了一种重复性、特异性和敏感性良好的AMDV荧光定量PCR 检测方法,可用于 AMDV的临床检测和流行病学调查。
阅读原文:水貂阿留申病毒VP2基因TaqMan荧光定量PCR检测方法的建立与应用.pdf
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