目的 建立树鼬脊髓来源的微血管内 皮细胞体外分离培养技术，用71型肠道病毒（enterovirus 71，EV71）感染该细胞，探讨其感染特性，为 EV71损伤中枢神经系统机制的研究提供基础。 

方法 采用II型胶原酶、分散酶、DNase I三酶联合两次消化树鼬脊髓组织后，获取微血管内皮细胞，并进行纯化和鉴定。用E V71感染树鄙脊髓微血管内皮细胞，测定感染不同时间点的细胞及其培养上清液中病毒载量。采用间接免疫荧光法检测细胞中 EV71标志蛋白的表达，以确定E V71 对树鼬脊髓微血管内皮细胞的感染性。 

结果 分离培养获得的树鼬脊髓微血管内皮细照量典判的分专状和出珠状。经讨吟簇委纯化培Z后的1传代细监主要是不却川的多角状细胞; 细胞免疫荧光鉴定结果显示，微血管内皮细胞标志蛋白 CD31和血管性血友病因子（von Willebrand factor，vWF）表达都呈阳性。用感染复数为1的 EV71感染树鼬脊髓微血管内皮细胞，可见典型的细胞病变，且病毒滴度可达32 ×10* TCIDso/mL，表明FV71 可成功感染树献脊髓微血管内皮细胞并有效增殖;而且在4 8 h 内，细胞培养上清液中病毒载量呈线性升高，而细胞中病毒截量在12 h 到达顶峰。间接免疫荧光法在EV71感染后12 h 的树鼬脊髓微血管内皮细胞质中可检测到病毒颗粒。 

结论 成功建立了树鼬脊髓微血管内皮细胞体外分离培养方法，确定了E V71 对树脊髓微血管内皮细胞的感染性和病毒增殖特性，为开展EV71 入侵中枢神经系统的机制研究提供了一定基础。

阅读原文：树脊髓微血管内皮细胞的分离培养及EV71感染实验.pdf