神经干细胞（NSC）是多能干细胞，可以分化为神经系统的多种细胞，包括神经元、星形胶质细胞、少突胶质细胞等等。神经干细胞可以从哺乳动物大脑的不同区域和脊髓等神经系统中分离出来，具有重建神经环路、修复神经组织等能力，因此，神经干细胞在神经退行性疾病动物模型、遗传性中枢神经系统疾病、中风和脊髓损伤等方面有着广泛的研究价值。

那么，当我们从神经组织中分离出原代细胞，并进行纯化后，如何鉴定其中的细胞就是神经干细胞呢？无独有偶，神经干细胞也可以从形态学特征、特异性抗原表达和分化潜能三方面进行判断。

 1 形态学特征

神经干细胞可做悬浮培养，在生长过程中细胞呈聚球生长。从细胞形态来看，细胞团无或有较短的突起，形态上与其他种类的细胞没有明显的差异。当然，神经干细胞也可进行贴壁培养。 

神经干细胞悬浮培养

2 特异性抗原表达

特异性抗原表达是神经干细胞鉴定中的一项重要指标，可以利用免疫荧光检测对其分子标志物进行验证。例如，巢蛋白（Nestin）的表达被视为神经干细胞最具代表性的标志物，它在神经胚胎形成时开始表达，随着神经干细胞的迁移和分化的完成，表达量逐渐下降甚至完全停止。 

β3-Tubulin是神经元的结构蛋白，作为神经元标志物，β3-Tubulin阳性是鉴定神经元的必要条件。GFAP是星形胶质细胞的特异性标志物，少突胶质细胞的标志物是GalC或OSP。 

神经干细胞特异性抗原表达鉴定的一般标准为：

★ Nestin 阳性表达率≥75%；

★ β3-Tubulin阳性表达率 ≤10%；

★ GFAP阳性表达率≤10%；

★ GalC或OSP阳性表达率≤10%。 

神经干细胞免疫荧光染色鉴定

Nestin染色阳性，GFAP、Tubulin染色阴性，表明该细胞为神经干细胞。

 3 分化潜能

神经干细胞具有良好的分化潜能，能向神经元、少突胶质细胞、星形胶质细胞等自发分化或诱导分化。 

①  自发分化

神经干细胞在含血清培养基中培养大概7天，会自发分化为神经元细胞 （16±7%）、 星形胶质细胞 （75±7%） 、少突胶质细胞（5±3%），此时可表达β3-Tubulin、GFAP、GalC或OSP标志物。如GFAP高表达而Nestin低表达，则可判定该细胞为星形胶质细胞。 

②  诱导分化

除了自发分化，神经干细胞可在特定培养条件下向诱导方向分化，如神经元方向分化、少突胶质细胞分化。用诱导液诱导神经干细胞成神经元方向分化，可使分化比例升至60%以上。一旦神经干细胞分化为神经元和胶质细胞，Nestin便停止表达。 

神经干细胞诱导分化免疫荧光染色鉴定

GFAP染色阳性，Hochest复染细胞核阳性，2组染色结果表明该细胞诱导后为星形胶质细胞。 

Tubulin染色阳性，Hochest复染细胞核阳性，2组染色结果表明该细胞诱导后为神经元细胞。 

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