一、家兔的获取

(一)家兔的来源

实验用家兔必须来自于具有《实验动物生产许可证》的供货商。同时，应能提供近期的家兔种群的质量检测报告。从境外引进家兔，按照实验动物进出口的有关规定执行。

(二)运输与接收

1.运输

1)运输的分类与方式

家兔的运输根据运输距离、运输时间和方式可分为长途航空运输、长途陆地汽车运输及短途汽车运输等。长途运输是指相对于城内运输的运输时间超过5h以上的运输过程，通常为城际运输。按运输工具分为陆地汽车运输和航空运输两种。陆地汽车运输是指使用具备可以调节车厢内温度的厢式汽车运输啮齿类和兔类实验动物。航空运输是指使用飞机运输啮齿类和兔类实验动物，动物必须存放于可以调节温度及供氧的舱内；从始发地搬运至机场和从机场搬运至目的地使用具备可以调节车厢内温度的厢式汽车。

2)运输证明

托运人或其所授权的代理人，在托运兔类实验动物前需提交填写清楚的下列证明：①经国家农业部批准统一印制编号、由各省市动物卫生监督所出具的“出县境动物检疫合格证明”，此证一式二联，第一联存根，第二联随动物同行；②提交由各省市实验动物管理办公室统一印制编号的“实验动物质量合格证”，此证一式三联，第一联出售单位收执，第二联购买单位收执，第三联留存。其中第二联随动物同行。

3)运输容器外表标志

在每个运输容器外应贴上一个“活体动物标志”、“实验动物标志”和“向上”的标志(图14-3)，以指明运输容器中的是活体的实验动物及应按图标直立放置。

4)运输容器的要求

家兔的运输容器可由瓦楞纸、钙塑板和无毒塑料等材料制成。其基本要求是要有一定的强度，在搬运中不致损坏及能够保持最高不超过五层的堆叠；不会被动物以牙、爪等破坏；在保证坚固度的情况下，应尽量使运输箱轻便。根据兔类实验动物的质量控制要求，清洁级以上家兔的运输箱应为密封带通风窗，通风窗上应有过滤膜，同时设置透明的观察窗。运输箱内壁应无任何硬质的尖锐物，以保证在运输途中动物不受伤害。运输箱底部应铺有柔软、洁净、干燥的垫料，以保持运输途中运输箱内部环境的清洁。

2.接收

在得到供货商运输信息后，应做好接收家兔的准备，尤其是对于长途运输的动物应在最短时间内做好接收工作。收到后检查运输箱的完整性，确认运输箱包装完好无损坏。核对包装箱上标签的信息与订货要求是否一致。根据家兔的质量等级将家兔及时移到合适的隔离检疫场所或过渡暂养设施中。对于清洁级以上家兔，在接收过程中如发现动物包装有破损导致动物不能直接放入屏障的，必须将动物按照相关规定处理，禁止拒收动物或随意处死、丢弃。收到家兔后，按照本章第二节的引种要求对家兔进行临床观察。如动物的临床检查为正常，由实验负责人签字后接收，并注明接收日期、家兔的种类、数量、性别等。接收后的家兔应做相应的标志(如耳标、性别、体重、来源及性情描述等)，并单独饲养于洁净的笼具内，提供新鲜饮水和食物，至少适应5～7天后方可投入实验。如发现家兔具有明显的临床损伤、疾病或畸形时，应告知兽医师和实验负责人，并最终决定是否予以拒收。

(三)隔离检疫

对新购进的家兔必须隔离检疫，包括一般临床检查与微生物、寄生虫检测。

1.一般临床检查

家兔接收后暂存于隔离设施或观察室中，由兽医师或技术人员对家兔进行大体检查，包括体温测定，耳部是否有耳螨或损伤，体表是否有损伤、疤、皮屑和体外寄生虫，眼睛、鼻子是否有分泌物，分泌物的颜色及黏稠度，触诊腹部，感受腹部是否有肿块、疼痛等。每天观察家兔，对于有异常的应及时会同兽医师进行诊断，对于出现感染体征或明显传染病特征的家兔应及时实施安乐死。

2.微生物和寄生虫检测

对于未提供近期健康报告或来自于疫区的家兔，应适当延长隔离时间，进行微生物和寄生虫质量检测。检测指标根据实验需要及疫区的情况而定。检测方法按照GB/T14926.42-2001和GB/T 14926.43-2001标准执行。

二、基本操作技术

1.抓取与保定

1)徒手法

右手从兔头前部把两耳轻轻压于手掌下，使兔匍匐不动，将兔颈背部的被毛和皮肤一起抓住，提起兔，把兔子从笼子里拿出来，左手托住腰部，使体重主要落在左手上，调整方向将兔头藏于左肘弯内，左手则腾出抓住兔的后肢，同时右手按住兔颈背部。

注意事项：只提兔的两耳、后腿、腰部或者背部皮毛，容易因动物挣扎而造成这些部位损伤；兔脚爪锐利，抓取时应注意防备四肢活动，以免被兔爪抓伤，必要时戴防护手套。

2)器械法

兔固定架固定：用于未麻醉的兔，通常露出头部和尾部。

解剖台固定：用于麻醉后的兔，拉直四肢并用绳索固定，头部以固定夹固定或用一绳索牵引兔门齿予以固定。

注意事项：根据兔体大小和操作目的选择合适的固定器械。

2.供试品给予方法

1)经口途径

灌胃法：家兔的经口给药常用的方法是灌胃法。根据家兔的大小可选用儿童胃管或导尿管。给药时辅助人员右手抓住兔的颈部，左手抓住膝部，将躯体塞在右臂下限制其活动。实验操作人员右手食指卷曲兔唇，暴露上下齿之间的间隙，将导管从舌头上方或旁边插入兔嘴里。握住导管的把手，进一步往里插，同时观察与家兔呼吸窘迫有关的体征，一旦这些体征出现或感到导管阻塞时，应立即拔出并重新插入。插至食道30cm左右时，经水杯确认没有误入气管，再慢慢推动注射器将药物注入。如果应用拉链固定包和开口器也可以一个人完成操作。

2)自由采食法

如果供试品不影响适口性，也可以采用融入饮水中、加工于饲料内让家兔自由采食。

3)经皮途径

家兔是皮肤刺激试验和皮肤过敏试验的常用动物，常采用背部脱毛、涂布药物的方法，利用专用马夹固定保护涂药部位。

4)注射途径

皮下注射：一般选择家兔肩胛间的背部区域。

皮内注射：一般选择家兔肩胛间的背部区域。

静脉注射：一般选择家兔耳缘静脉。

肌内注射：一般选择家兔后肢的大腿外侧或腰肌部位。

腹腔注射：腹腔注射一般由两人完成。辅助人员将家兔的头置于左臂下做拥抱姿势，用右手拉颈背使头后仰，以暴露腹部表面。然后将兔仰卧于工作车或实验台上，并保持头部低于四肢。选择腹部中线靠近膀胱的位置作为注射点。插入针头，回拉活塞无血液或阻塞后将药物注入腹腔。

脑内注射：家兔麻醉后，剪去额部注射部位被毛，消毒皮肤，将皮肤向一方推挤使其与头骨错位并绷紧，用手术刀在注射部位切开1～2mm切口，用穿颅钢针在头骨上钻出小孔，用注射器针头垂直刺入5mm左右缓慢注射药物，注射后使皮肤回复原位覆盖小孔并消毒伤口。一次注射参考剂量：0.2～0.3ml。

3.样品采集

1)血液采集

耳缘静脉采血：将家兔以固定架固定，拔去耳缘静脉局部的被毛，用75％乙醇消毒后用手指轻弹兔耳，使静脉扩张；用23G针头刺耳缘静脉末端，血液即流出。本方法为家兔最常用的采血方法，一次可采血5ml左右，多次重复采血从耳尖开始。

耳中央动脉采血：将家兔以固定架固定，在兔耳中央找到一条较粗的，颜色较鲜红的血管即为中央动脉，在其末端，沿着与动脉平行的向心方向刺入动脉，抽吸注射器活塞，血液流进针管。由于兔耳中央动脉容易痉挛，故抽血前必须让兔耳充分充血，采血动作要迅速，采血后应立即压迫止血，此法一次可采血10～15ml。

心脏穿刺采血：将麻醉后的家兔仰卧位固定，用弯头剪剪去心前区被毛，再用75％乙醇消毒皮肤，在左胸3～4肋间用左手食指摸到心搏最强处，右手持注射器垂直胸壁进针约3cm，血液随心搏自然流进注射器，采取所需的血量，拔出针头，用药棉压住穿刺点止血。

2)尿液和粪便的采集

家兔尿液和粪便的采集一般使用配有尿液和粪便分离装置的代谢笼。通常让家兔在代谢笼内过夜，第2天收集尿液和粪便。除非实验设计中有特别说明，一般整个晚上停止饮水。

另外，家兔尿液的采集还可以采用输尿管插管、尿道插管、穿刺膀胱、压迫膀胱、破腹采尿等方法进行。

3)精液的采集

假阴道法：采用兔假阴道，调节假阴道的温度和压力达到采精要求(温度一般为39～41℃)，并在假阴道开口端涂润滑剂，选择健康雌兔放入雄兔笼内诱其爬跨，采精者一手抓住雌兔双耳和颈部皮毛，一手持假阴道伸入雌兔腹下，使假阴道开口紧贴雌兔阴户，调整至合适的位置和角度，在雄兔接受足够刺激射精前，将假阴道套于雄兔阴茎上，雄兔射精完后发出咕咕的叫声，此时取下假阴道，抬高开口端取出集精器。也可用处理过的兔皮扎在持假阴道的手臂上或者假台兔代替雌兔。一次可采集精液0.25～2.00ml。

电刺激法：将雄兔呈站立或卧位固定，剪去包皮周围的被毛，并用生理盐水冲洗，拭干，将电极棒插入直肠，靠近输精管壶腹部的直肠底壁，插入深度约5cm，选择频率，开通电源调节电压由低到高，至兔勃起射精，收集精液。电刺激法的参数一般为：频率15～20Hz，电压3V、6V、9V或12V，电流100mA，通电3～5s，间隔5～10s。

4.麻醉与镇痛

1)全身麻醉

(1)吸入麻醉：将乙醚倒在脱脂棉上投入麻醉盒，将家兔放入麻醉盒，迅速盖好盖

子，观察兔活动和状态，1～2min后可见到兔后肢依次出现麻痹而后失去运动能力，4～6min后，兔不能站立，肌肉松弛，四肢紧张性明显减低，角膜反射迟钝，皮肤痛觉消失，即已进入深度麻醉。在实验过程中如需追加麻醉，可采用合适大小的辅助麻醉瓶，套在兔的口鼻上进行。也可采用吸入式麻醉机。

(2)注射麻醉：常用的麻醉剂包括硫喷妥钠、氯胺酮、氨基甲酸乙酯(乌拉坦)、戊巴比妥钠等。

硫喷妥钠：1％～5％水溶液，腹腔注射25～50mg/kg体重，静脉注射7～20mg/kg体重，静脉注射速度以15s注射2ml左右进行。宜现配现用，一次给药的麻醉时效维持15～30min，在历时较长的实验操作中可重复注射维持麻醉。

氯胺酮：肌内注射或皮下注射25～45mg/kg体重，静脉注射10mg/kg体重。一次给药的麻醉时效维持10～20min。

氨基甲酸乙酯(乌拉坦)：20％～25％水溶液，腹腔注射、皮下注射750～1000mg/kg体重；5％～10％生理盐水溶液，静脉注射750～1000mg/kg体重；直肠灌注1500mg/kg体重。一次给药的麻醉时效维持2～4h。

戊巴比妥钠：生理盐水溶液腹腔注射，40～50mg/kg体重，静脉注射30～35mg/kg体重。一次给药的麻醉时效维持2～4h。戊巴比妥钠对于家兔的麻醉剂量与致死剂量比较接近，需谨慎使用。

2)局部麻醉

参照大鼠的有关内容(第十一章)执行。

5.安死术

(1)过量麻醉法：耳静脉内注射戊巴比妥钠120mg/kg(戊巴比妥钠浓度为240mg/ml)，根据家兔的个体差异及其他额外需要，可适当增加剂量。

(2)急性失血法：家兔麻醉后，心脏放血或股动脉放血，直至动物死亡。

(3)CO2吸入法：将家兔置于封闭容器内，接通气体输送管通入CO2，直至家兔死亡。目前已有商品化的实验动物CO2窒息器。