间充质干细胞的鉴定方法
间充质干细胞(MSC)是属于中胚层的一类多能干细胞,最初在骨髓中被发现,自此进入科研学者的视线。MSC来源丰富,可从骨髓、脂肪、牙髓、胎盘、脐带、肝等许多组织中提取获得,经过连续多代的培养,仍然能保持高度的增殖和分化潜能,而且免疫原性比较低,基本不存在免疫排斥反应,临床使用中不需要配型。因具有许多得天独厚的优势,MSC现已成为干细胞研究领域中的人气明星。
但是,你知道什么样的细胞才是MSC吗?又该如何为MSC鉴定身份呢?其实,我们可以通过形态学鉴定,表面标志物鉴定和多向分化潜能鉴定这三种方法来为MSC验明正身。
01 形态学鉴定
MSC多数呈纤维细胞样生长,在支持物表面呈梭形或不规则三角形,细胞中央有卵圆形核,胞质向外伸出长短不同的突起。传代后细胞呈均质、旋涡状排列。几乎所有的MSC都是贴壁生长,具有较强的贴壁能力。
02 表面标志物鉴定
MSC的细胞表面标志物鉴定常采用流式细胞仪来进行。MSC属混杂细胞群,其表面抗原也具有非专一性, 它可同时表达间质细胞、内皮细胞和表皮细胞的表面标志,如粘附因子、生长因子和细胞因子受体以及整合素家族等。
MSC的细胞表面标志物鉴定标准为:
① CD105、CD73和CD90阳性率≥90%;
② CD45、CD34、CD14或CD11b、CD79α或CD19、HLA-DR呈阴性,阳性率≤5%。
不同组织来源的MSC可共享相同的细胞表面标记,如CD29和CD44。
03 多向分化潜能鉴定
MSC具有在体外分化为成骨细胞、软骨细胞、脂肪细胞、肝细胞等定向分化的能力,所以鉴定MSC的多向分化潜能也是重要的鉴定方法之一。MSC成骨诱导分化最常用的染色方法是茜素红染色法,成脂诱导分化最常用的染色方法是油红O染色法,而成软骨诱导分化最常用的方法是阿利辛蓝染色、悬浮培养。
以上就是MSC三种常用鉴定方法,你都学会了吗?
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