目的 探索小肠隐窝分离，小肠类器官培养、传代、冻存、复苏和蛋白提取的方法，研究 R-Spondin1的浓度对小肠类器官成熟的影响。

方法 分离小鼠小肠隐窝，在模拟体内肠道干细胞生长 、增殖的体外 3D 培养体系中培养，倒置显微镜观察小肠类器官的形成过程。用1 mL注射器切割小肠类器官进行传代。设置 R-Spondinl浓度梯度，在不同时间点比较小肠类器官形态。

结果 成功的完成了小肠类器官的分离培养、传代、冻存、复苏及蛋白提取工作。确定了隐窝与单细胞可以进行培养的比例标准且发现在 R-Spondinl 浓度低于 0.5 μg/mL 的培养基中，小肠隐窝不能成长为成熟的小肠类器官。

结论 小肠类器官体外培养体系的建立 尤其传代培养的成功将为在体外长期研究小肠上皮提供新的、更符合生理的实验模型。隐窝与单细胞比例标准的确定将大幅提高小肠类器官培养的成功率，蛋白质的提取将有利于蛋白组学的研究。

阅读原文：小肠类器官的构建及传代培养.pdf