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实验方法

不同年龄小型猪肝酶组织化学研究

2021年09月23日 浏览量: 评论(0) 来源:《中国实验用小型猪》 作者:冯书堂 主编 责任编辑:yjcadmin

1.材料和方法  贵阳中医学院实验动物研究所培养的纯系小型猪,按断奶前、幼年、成年分为3组,每组3只,全部股动脉放血处死,立即取肝组织,合包包埋,液氮中骤冷,恒冷(-15℃)切片,作18种酶组织化学观察,所染酶及方法见表2-2所示。

2.结果  为比较酶活性强度差异,根据染色颜色深浅,将酶活性分为5个等级:+、+~++、++、++~+++、+++,其活性强度依次递增,结果见表2-3所示。

从表2-3中可得出:贵州小型猪肝小叶周围肝细胞(邻近汇合区)与肝中央静脉周围的肝细胞酶染色强度一致,无区带之分。大部分酶定位于肝细胞胞浆中,ACP定位于毛细胆管周,ATP定位于毛细胆管,5'-N定位于肝血窦。LDH、SDH、ICDH、HGK、NADPH、CC0、GDH、G-6-PD的酶活性为:断乳前>幼年≥成年;α-GPDH、CK、GPM、MDH、NADH的酶活性:断乳前=幼年=成年,ACP、β-Gr、MAO、HBD的酶活性:断乳前<幼年≤成年。

3.讨论

(1)小型猪肝细胞存在完整酶系统  SDH、ICDH、CCO等参与有氧代谢,LDH参与无氧酵解, GPM参与磷酸戊糖支路。α-GPDH、HBD与甘油三酯酮体代谢有关,GDH与氨基酸代谢有关。 NADPH与肝细胞药物代谢及解毒内能有关。小型猪肝脏与人类一样,是一个体内重要代谢器官,是一个酶库。

(2)小型猪肝组织酶活性分布与人类有差异  大量的研究资料表明,后者酶活性强度在小叶中央区及周围区明显不同,尤其是代表糖有氧代谢酶(如SDH、CCO)和糖酵解的酶(LDH)。 SDH、CCO在小叶周围活性明显高于中央区,而LDH恰恰相反,人类肝组织酶分布特点与其肝供血血管分布走向相适应。小型猪肝组织酶活性分布均匀,无区带之分,其形成因素及意义有待进一步研究。

(3)小型猪酶在细胞内的定位与人类完全一致  大部分酶分布于胞浆内,有些在胞液中(LDH),有些在线粒体内(CCO),有些在内质网(NADPH),ACP分布于毛细胆管周。如果在电镜下观察,实际上毛细胆管周分布着溶酶体,ACP定位于肝溶酶体;5'-N定位于肝血窦,是一种膜酶,与物质转运有关;ATP定位于毛细胆管,也是一种膜酶。

(4)小型猪肝细胞中参与有氧代谢及无氧酵解酶  其活性规律是:部分断乳前>幼年≥成年,部分断乳前=幼年=成年。从总体上看,断乳前肝细胞能量代谢活跃,磷酸戊糖支路也是断乳前活跃。磷酸戊糖支路在于提供磷酸核糖,是核苷酸合成必需的物质。断乳前磷酸戊糖支路活跃代表肝细胞蛋白质核酸合成旺盛。ACP、β-Gr、HBD、MA0为成年>幼年>断乳前,表明细胞的成熟,各年龄组酶活性变化符合细胞生长发育规律。

(5)结论  本实验通过对不同年龄组小型猪肝酶组织化学观察,发现小型猪肝组织酶丰富,与人类相似,小型猪肝细胞内酶定位与人类相同,不同年龄组肝组织酶活性变化符合生长发育规律。

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