目的 探究 miR-433-3p 在过氧化氢(H2O2 )诱导的大鼠心肌细胞(H9c2)损伤中的作用及具体机制的研究。 

方法 构建氧化应激损伤模型,以 H9c2 心肌细胞为研究对象,通过转染 miR-433-3p 模拟物(miR-433-3p mimics)、miRNA 阴性对照(miR-NC)、阴性对照(pcDNA-NC)和 MAPK8 过表达质粒(pcDNA-MAPK8)至 H2O2 诱导 的 H9c2 细胞中,将细胞分为对照组(Control),H2O2 模型组(H2O2 ),H2O2 + miRNA 阴性对照组(H2O2 + miR-NC), H2O2+ miR-433-3p 模拟物组(H2O2+ miR-433-3p mimics),H2O2+ miR-433-3p 模拟物 + pcDNA 阴性对照组(H2O2 + miR-433-3p mimics + pcDNA-NC)和 H2O2 + miR-433-3p 模拟物 + MAPK8 过表达组( H2O2 + miR-433-3p mimics + pcDNA-MAPK8)。 采用 qRT-PCR 法检测 miR-433-3p 和 MAPK8 在 H9c2 细胞中的 mRNA 表达水平。 MTT 法和 ELISA 试剂盒分别检测细胞活性和乳酸脱氢酶(LDH) 释放量。 Western blot 法检测 Bax、Bcl-2、Caspase-3、Cleaved Caspase-3、MAPK8 和 GAPDH 的蛋白表达水平。 双荧光素酶报告实验检测 miR-433-3p 与 MAPK8 之间的靶向关 系。 

结果 与对照组相比,miR-433-3p 在 H2O2 诱导的心肌细胞 H9c2 中低表达。 相比较 H2O2 + miR-NC 组,miR- 433-3p 过表达可以显著降低 LDH 释放量并增强细胞活力。 此外,相比较 H2O2 + miR-NC 组,miR-433-3p 过表达可以显著降低促凋亡蛋白 Bax 和 Cleaved Caspase-3 的表达水平,而促进抗凋亡蛋白 Bcl-2 的表达水平。 双荧光素酶报告实验显示 miR-433-3p 可以靶向结合 MAPK8 并负调控 MAPK8 的表达。 过表达 MAPK8 可逆转 miR-433-3p 过表 达对 H2O2 诱导的 H9c2 细胞活性损伤和细胞凋亡的抑制作用。 

结论 miR-433-3p 通过负靶向调控 MAPK8 在 H2O2 诱导的心肌细胞损伤中发挥保护作用。 

阅读原文：miR-433-3p通过调控MAPK8蛋白在H2O2诱导的心肌细胞损伤中发挥保护作用.pdf