一、犬的获取

1.来源

实验用犬应购自有犬类实验动物生产许可证的单位。

2.运输与接收

(1)实验动物的运输应遵循国家有关活体动物运输的相关规定，国际运输应遵循国际航空运输联合会(IATA)的有关规定。

(2)采用专用航空运输笼，运输笼具需经消毒、灭菌后方可回收使用，雌雄分装。

(3)长途采用航空、短途采用专用汽车运输。

(4)运输过程中，禁止与有毒有害物品和其他动物混运。

(5)在途时间在12h内的，可以不饲喂饲料和饮水，在途时间为12～24h的，只需要提供饮水；在途时间超过24h的，应提供饲喂饲料和饮水。

(6)运输怀孕犬，应遵循国内、国外有关法律法规且有专人负责制定整个运输计划。

(7)发运方应尽快将飞机航班号、到港时间等相关信息及时通知接收方，接收方接收后应尽快运送到最终目的地。

(8)动物到达后检查运输笼有无破损，并取出随附的档案资料。

(9)检查犬只编号是否清晰、有无外伤。

(10)对照该犬只档案检查精神状态、皮毛、眼、口腔、耳、四肢、肛门、外生殖器、粪便等有无异常。

3.隔离检疫

参照本章第二节引种管理的有关内容。

二、基本操作技术

(一)抓取与保定

1.Beagle犬及经训练犬只的抓取与保定

(1)抓取犬只时必须戴手套，穿长袖工作服；动作尽量轻柔，禁止突发动作。

(2)以正常步速进入饲养室，以友善的目光观察犬只1～2s，用一只手跟犬打招呼问好，跟犬建立初步信任，打开门后用手轻拍犬脸侧部或抚摸其头加深犬只对人的信任后，一手迅速抓住犬两前肢上臂部，一手抚摸犬后颈部，然后一手用力将犬往上提，另一手托住腹部将犬只抱至运输车或保定架。

(3)将犬抱到保定架后，停留1～2s，将后肢放入定位孔，由助手抚摸犬后背部帮助保定，然后两手将犬两前肢分别放入定位孔，抚摸犬后颈部，使犬只安定。

(4)对工作人员信任度不够或兴奋性高的犬只，可以采取抓取两前肢和后颈部皮肤的办法，防止犬嘴部靠近保定前肢的手造成误伤。

(5)禁止以抓揪犬后颈部或后躯部皮肤、提尾巴、抓耳朵的方式抓取；禁止单手抓提犬只。

2.其他犬只的抓取与保定

1)铁制犬钳法

双手持钳，小心靠近，迅速用长柄捕犬夹夹住颈部，将犬按倒在地，由助手用纱布绑带将嘴绑好并在犬耳后打结或给犬带上金属网口罩，将四肢固定。

2)皮制项圈法

皮制项圈的大小为项圈与犬颈部的空隙可插入4指。将链绳与项圈连接，另外一端拴在笼门上；拉动犬只时，一边与犬交流一边轻拉链绳拉出室内。需要时可用纱布绑带将嘴绑好或带上金属网口罩。

3)不锈钢笼保定法

保定笼的一边可移动。慢慢移动挤压装置，将犬压缩至不能转身。如要移出笼外，肌内注射盐酸氯胺酮5～15mg/kg体重麻醉。需要时可用纱布绑带将嘴绑好或带上金属网口罩。

(二)供试品给予方法

1.经口途径

1)徒手给药法

经口腔的供试品应制成小丸状，一人抓住犬只前肢往上提，后肢着地，另一人戴手套，一手拿供试品，一手捏住上颌尽量使其张开1：3，将供试品送至舌根部，合上嘴轻拍颈部使其吞咽。

2)强饲法

保定状态下，由一人将犬嘴张开，另一人左手用压舌板压住犬舌，右手用药匙把供试品送至舌根部，取出压舌板，喂少量饮水，合上嘴、抬其头使其下咽。

3)混合饲料给药法

把供试品与粉末状饲料充分混合做成颗粒状，让犬自由采食给药。

4)灌胃法

将犬仰卧固定或站立固定，将扩口器(木质，长10～15cm，直径1～3cm，中间开1个直径5～10mm的小孔)置于上下门3齿后，用绑带将嘴扎住并在耳后打结，用12"橡胶灌胃管经扩口器上的小孔缓慢插入，沿咽喉后壁进入食道，插入约20cm，可达胃内，将胃管另一端插入水中，如不出气泡，表示确已进入胃，而没误入气管内，即可灌入。

2.注射途径

1)皮下注射

器械和试剂：6号针头，5～10ml注射器，75％酒精棉球。

注射部位：颈背部或大腿外侧。

方法：用酒精棉球消毒注射部位，左手拇指和食指轻轻提起颈背部皮肤，沿纵轴从头部方向刺入并推进5～10mm，注射完5s后拔出注射针，并用手指轻压一下注射部位以免药液漏出。

2)皮内注射

器械和试剂：6号针头，5～10ml注射器，75％酒精棉球。

注射部位：颈背部或大腿外侧。

用酒精棉球消毒注射部位，注射针横断面向上，向皮肤平行方向轻轻刺入，回抽无血后推入药液，注射完后会形成皮丘，为免药液漏出注射完5s后再拔针。

3)肌内注射

器械和试剂：7号针头，2～5ml注射器，75％酒精棉球。

注射部位：臀部或股部。

方法：剪去注射部位被毛，用酒精棉球消毒注射部位，注射针横断面向上，成60°角轻轻刺入肌肉，回抽无血后推入药液，退针并用干棉球按压片刻。

4)静脉注射

器械和试剂：6号针头，5～15ml注射器，橡皮带，75％酒精棉球和碘伏。

注射部位：前肢内侧皮下静脉、后肢小隐静脉或颈静脉。

在保定状态下，剪去注射部位的被毛，用酒精棉球和碘伏消毒，用橡皮带扎紧(或用手抓紧)静脉近端，使血管充盈，从静脉的远端将注射针头平行刺入血管，待有回血后松开，缓缓注入药液或滴注。

5)腹腔注射

器械和试剂：7号针头，5～20ml注射器，75％酒精棉球。

注射部位：脐后腹白线两侧。

腹部向上保定，用酒精棉球消毒注射部位，用注射针平行刺入皮下5mm，再把针竖起45°穿过腹肌进入腹腔，回抽没有扎到脏器后，再慢慢注入药液。

6)脑内给药

器械和试剂：6号针头，1ml注射器，弯头剪，手术刀，穿颅钢针，75％酒精棉球和碘伏。

注射部位：两耳连线与两眼连线的中间。

方法：动物麻醉后，剪去注射部位的被毛，用酒精棉球和碘伏消毒注射部位，先用手术刀切开1～2mm的切口，用穿颅钢针穿透颅骨，再用注射器针头刺入5mm左右，然后徐徐注入药物，注射速度一定要慢，避免引起颅内压急骤升高。

7)小延脑髓池注射

器械和试剂：7号针头，1ml注射器，75％酒精棉球和碘伏。

注射部位：第一颈椎上方凹陷处。

方法：动物麻醉后，仰卧保定，剪去注射部位的被毛，用酒精棉球和碘伏消毒注射部位，让头尽量向胸部弯曲，注射者用左手触摸第一颈椎上方凹陷处，在凹陷处正中线顺水平方向刺入小延脑髓池，回抽见到清亮的脊髓液后徐徐注入。

(三)样品收集

1.血液样品采集

1)颈静脉、后肢外侧小隐静脉和前肢外侧皮下静脉采血器械和试剂：6号针头，2～10ml注射器，取血管，弯头手术剪，75％酒精棉球和碘伏。

方法：保定犬只，剪去取血部位被毛并消毒，用橡皮带扎紧(或用手抓紧)静脉近端，使血管充盈，针头平行刺入静脉，回抽见血后松开橡皮带或手，采血后用干棉球压针孔片刻。少量血液的采集可穿刺耳静脉采集。

2)股动脉采血

器械和试剂：6号针头，2～10ml注射器，取血管，弯头手术剪，75％酒精棉球和碘伏。

方法：仰卧保定犬只，伸展后肢，暴露腹股沟三角动脉，剪去取血部位被毛并消毒，抽血者左手探摸腹股沟动脉搏动处，固定血管，右手持注射针刺入血管，回抽见血后采集。

3)心脏采血

器械和试剂：7号针头，2～10ml注射器，取血管，弯头手术剪，75％酒精棉球。

方法：仰卧保定犬只，前肢向背侧方向固定，暴露胸部，剪去左侧第3～5肋间被毛并消毒，抽血者左手探摸心跳最明显处，右手持注射针刺入心脏，准确刺入即可见血，可抽取大量血液，采血后用干棉球按压止血。

4)颈静脉采血

器械和试剂：7号针头，2～10ml注射器，取血管，弯头手术剪，75％酒精棉球。

方法：侧卧保定犬只，剪去采血部位被毛并消毒，拉直颈部并使头尽量后仰，抽血者左手拇指压住颈静脉，针头沿血管平行方向向心脏端刺入血管采集，采血后用干棉球按压止血。

2.尿液样品采集

1)压迫膀胱法

新生犬和雌犬可通过轻拍和轻压腹部膀胱的方法采集。

2)插管法

用大小、长度合适的导尿管，外壁涂抹润滑油，将导尿管从尿道向膀胱慢慢插入，尿液自然流出或用注射器吸出。

3)代谢笼法

使用犬代谢笼或在饲养笼下放置尿液收集器采集，应避免饲料及饮水等落入收集器。

3.粪便样品采集

(1)由代谢笼或在饲养笼下采集。

(2)保定状态下，用消毒棉签插入肛门2～5cm采集。

4.精液采集

1)人工采集

选择成年公犬，由一人保定，另一人退开包皮后，用大拇指和食指轻轻刺激阴茎根

部直到射精。

2)电刺激法

麻醉公犬，站立或卧式保定，剪去包皮周围被毛，用生理盐水冲洗后再用无菌干棉球擦干，将电极棒插入直肠并靠近输精管壶腹部的底壁，选择频率，开通电源，由低到高调节电压直至阴茎勃起射精。

(四)麻醉与镇痛

1.全身麻醉

1)吸入麻醉

应用麻醉呼吸机，常用盐酸氯胺酮或戊巴比妥钠做诱导麻醉，以吸入麻醉剂维持麻醉。吸入麻醉剂多应用异氟烷或异氟醚。吸入麻醉的特点是能够保持呼吸道通畅，便于清除呼吸道内分泌物，能够给氧吸入和辅助呼吸，麻醉过程具有可逆，无蓄积，在机体内代谢率低，代谢产物无毒，安全性大，麻醉平稳，苏醒快的特点。缺点是麻醉用设备、药品较贵。

2)腹腔和静脉注射麻醉

腹腔和静脉注射麻醉剂量见表15-1。

2.局部麻醉

参见大鼠的有关内容(第十一章)执行。

3.镇痛

(1)轻度镇痛可用卡洛芬、酮洛芬、美沙酮、二氧羟吗啡酮等，可缓解犬手术后的痛苦，口服和注射均可应用。

(2)中重度镇痛可口服萘普生片、口服或注射酮咯酸、口服或注射美沙酮、口服可待因或双氢可待因。

(五)安死术

1.急性失血法

保定犬只，在犬耳静脉或前肢隐静脉注射3％戊巴比妥钠或5％苯巴比妥钠溶液麻醉后，将犬固定在手术台或手推车上，仰卧保定，固定四肢和口腔，切开皮肤，分离并结扎颈动脉，用血管夹向近心端挤压颈动脉内储血后夹住，切开无血端动脉，向近心端插入放血管扎紧，松开血管夹放血，直至无血液流出为止。

2.过量麻醉法

保定犬只，按90～100mg/kg体重快速静脉注射戊巴比妥钠，先停止呼吸再停止心跳死亡。也可以静脉注射其他麻醉药，一般以麻醉剂量的20～30倍应用。