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小鼠诺如病毒分离鉴定及病毒衣壳蛋白（VP1）基因测序分析
摘要： 目的 了解广东地区小鼠诺如病毒(murine norovirus,MNV)的分子遗传特征和进化来源.方法 采用小鼠巨噬细胞系RAW264.7细胞对RT-PCR检测为阳性的小鼠样本进行病毒分离,通过细胞病变、RT-PCR、间接免疫荧光试验、测序方法对病毒分离株进行鉴定.应用RT-PCR技术针对15株MNV分离株的VP1基因的1626个核苷酸片段进行基因扩增,将扩增产物连接在pMD18-T载体后转化到大肠杆菌中进行克隆.通过氨苄青霉素平皿筛选,将鉴定为阳性的克隆菌进行核苷酸序列测定及序列分析.将这15株MNV分离株与从GenBank获得的19株MNV参考株进行序列比较分析,基于VP1基因的1626核苷酸片段构建系统发生进化树,一起进行分子流行病学研究.结果 从80个小鼠样本中分离到了15株MNV病毒,通过细胞病变试验、RT-PCR试验、间接免疫荧光试验和测序分析鉴定确认分离到的病毒为MNV.序列分析结果显示MNV分离株的VP1蛋白基因全长均为1626个核苷酸,广东地区15株MNV分离株的核苷酸和氨基酸同源性分别在89.7％ ～ 100％和94.8％ ～ 100％之间,15株MNV分离株与其他19株MNV参考毒株核苷酸和氨基酸同源性分别在87.5％ ～92.9％和92.4％～ 98.2％之间.进化树分析表明来自设施A和设施D的13株病毒之间的亲缘关系较近,同属一个进化分支.来自设施B的ZD-1毒株和设施C的ZYY-163毒株与来自广东(K162)、日本(S7-P2、S7-PP3)、韩国(K4)和德国(Berlin/04/06/DE、Berlin/05/06/DE)同属另一个进化分支.结论 成功分离到15株MNV病毒.遗传进化分析表明广东地区的MNV分离株来源并不相同,来自设施B和设施C的MNV分离株与国外分离株的亲缘关系较近,而来自设施A和设施D的13株MNV分离株可能是本地固有的毒株.
关键词：小鼠诺如病毒 病毒分离鉴定 遗传进化分析
作者 ：袁文 张谱华 王静 刘香梅 赵维波 张钰 黄韧
作者单位 ： 广东省实验动物重点实验室,广东省实验动物监测所,广州510663
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