贵州小型猪是近年开发利用的新型医学研究实验动物。本实验目的在于观察小型猪不同年龄组肾脏的酶组织化学，即将形态学和酶活性结合起来观察酶在小型猪肾脏的分布及其酶活性的高低；比较不同年龄段的酶活性；比较小型猪和人体肾脏酶组织化学的异同，以丰富资料，为该新型实验动物用于医学研究，提供实用、科学的依据。

1.材料与方法

(1)实验动物  由贵阳中医学院实验动物研究所提供小型猪。根据不同年龄段分三个实验组：成年猪组、幼年猪组、乳猪组。每组雌雄小型猪各3只，共18只。

(2)酶组织化学  动物处死后，立即取材：肾皮质约5mm，进入液氮骤冷。用恒冷切片机切片。染色的酶种类和方法见表2-9所示。酶活性强弱以半定量方法记录：可疑阳性(±)，弱阳性(＋)，阳性(＋＋)，强阳性(＋＋＋)，极强阳性(＋＋＋＋)。

2.结果  各个年龄组的小型猪肾酶的分布及其酶活性见表2-10所示。由表2-10可见肾酶非常丰富，不论是脱氢酶或水解酶均有较高活性。近端小管与远端小管酶分布形式有明显不同。近端小管酶活性较高的有ATP、ALP、SDH，远端小管酶活性较高的有ACP、G-6-P、CCO。三个实验组活性有较大差别的肾酶包括NADPH、G-6-P、ATP、ALP、β-Gr、ANAE。成年猪组的这些酶活性较乳猪明显增高。酶活性变化不大的有SDH、NADH、β-OHBD、CCO、ACP、NAE。乳猪组酶活性较高的有LDH和G-6-PD。

3.讨论  肾脏是泌尿系统的重要器官。有许多重要生理功能。例如，排泄体内代谢的终末产物如尿素、有机酸等，调节机体的水、电解质、酸碱平衡等，以及内分泌功能，产生激素和生物活性物质。所以肾脏的酶非常丰富。我们选择观察的酶主要分为两大类，即脱氢酶和水解酶。脱氢酶包括有氧代谢酶和糖酵解酶，前者的代表酶主要包括SDH、MDH、NADH和CCO，后者的代表酶有LDH，另外还有与细胞增殖有关的G-6-PD。水解酶包括细胞膜酶ATP、ALP、溶酶体酶ACP、β-Gr，与糖异生有关的G-6-P、酯酶ANAE和NAE。实验结果表明，不论是脱氢酶或水解酶，小型猪均显示强阳性。因功能而异不同的酶在肾实质的各种肾小管分布形式有明显不同特点之一是近端小管是物质重吸收的重要场所，有刷状缘增加其表面面积。在酶组织化学上，表现膜酶ATP、ALP极强阳性，而与能量代谢和糖异生有关的SDH、CC0、G-6-P在远端小管活性较高。此外，溶酶体酶ACP在远端小管也有较高活性。肾直管酶活性高于曲管的酶为NADPH。

不同年龄组小型猪肾脏酶分布形式完全一致，但部分酶活性有差异。随年龄增加酶活性上升的酶有：G-6-P、ATP、ALP、β-Gr、ANAE、NADPH。可见主要为水解酶，这可能与肾脏某些功能逐渐发育成熟有密切关系，如NADPH与细胞微粒体解毒功能有关，刚出生的动物该功能是非常微弱的。与年龄增长关系不大的酶有SDH、MDH、NADH、β-OHBD、CCO和ACP，主要为脱氢酶，乳猪组酶活性较高的有LDH和G-6-PD，这一点与小型猪的心肌细胞酶组织化学相同。需要指出的是，这些酶活性差异在小型猪组与成年猪组之间表现很突出，而幼年猪组的酶活性与成年猪组差异很小。主要为幼年时肾功能发育接近成年。

我们在以前的工作中，积累了大量的人体酶组织化学资料。人体肾脏酶组织化学见表2-11。比较小型猪与人体的肾脏酶组织化学，发现二者在酶分布和酶活性强弱两方面趋势完全一致。如前所述，不论是脱氢酶或水解酶，小型猪均显示极强阳性，如SDH、NADH、CCO、ALP、G-6-P、ATP等。就酶分布的形态看，SDH、CCO等在远端小管酶活性高于近端小管，且又以远直管较强，膜标志酶ALP、ATP均分布于近端小管的刷状缘，又以近直管较强。总之，小型猪与人体的肾脏酶组织化学有可比性和高度一致性，用于医学研究是完全可行的，小型猪不失为一种经济、可靠的新型医学实验动物，具有广阔的应用前景。

4.小结  本实验通过观察小型猪不同年龄组的肾脏酶组织化学，发现其酶活性非常丰富，不论是脱氢酶或水解酶均有较高活性。不同的酶在肾实质的各种肾小管分布形式有明显不同。不同年龄组小型猪肾脏酶分布形式完全一致，但部分酶活性有差异。多数水解酶随年龄增加酶活性上升。而SDH、MDH、NADH等脱氢酶随年龄增长变化较小。乳猪组的LDH和G-6-PD活性较高。比较小型猪与人体的肾脏酶组织化学，发现二者在酶分布和酶活性强弱两方面有高度一致性，作为研究有关肾脏病和某些药理学、毒理学的实验动物，贵州小型猪具有广阔的应用前景。