目的 探讨miR-27a调控PI3K/AKT/mTOR通路介导的自噬对肺炎链球菌(SP)诱导人肺泡上皮细胞(HPAEpiC)损伤的影响。   

方法 用1×108 CFU/ mL SP 诱导 HPAEpiC,在诱导前 48 h 使用 Lipofectamine 3000 转染试剂盒分别转染细胞 miR-27a-NC(miR-27a-NC 组)、miR-27a-inhibitor(miR-27a-inhibitor 组)、pcDNA-NC( pcDNA- NC 组)、pcDNA-PI3K ( pcDNA-PI3K 组), 共转染细胞miR-27a-NC 和 Si-NC ( miR-27a-NC + Si-NC 组)、 miR-27a- inhibitor 和 Si-NC(miR-27a-inhibitor+Si-NC 组)、miR-27a-NC 和 Si-PI3K(miR-27a-NC+Si-PI3K 组)、miR-27a-inhibitor 和 Si-PI3K(miR-27a-inhibitor+Si-PI3K 组)。 另取非诱导细胞为对照组,诱导且未转染细胞为诱导组。 qRT-PCR 检测正常 HPAEpiC和SP诱导的 HPAEpiC 中 miR-27a 表达水平;生物信息学预测和双荧光素酶验证 miR-27a 和 PI3K 靶向关系;CCK-8 法检测细胞增殖活性;流式细胞仪检测细胞凋亡率;ELISA 法检测细胞上清液中 IL-6 和 IL-10 含量;Western blot 检测细胞中PI3K、Beclin1蛋白表达水平、LC3-II/ I 比值以及 AKT、mTOR 蛋白磷酸化水平。 

结果 与对照组相比,诱导组细胞 miR-27a 表达水平、细胞凋亡率、IL-6 含量、Beclin1 蛋白表达水平和 LC3-II/ I 比值升高 (P<0. 05),PI3K 蛋白表达水平、细胞增殖率、IL-10 含量、AKT、mTOR 蛋白磷酸化水平降低(P<0. 05)。 与 miR-27a- NC 组相比,miR-27a-inhibitor 组细胞 miR-27a 表达水平、细胞凋亡率、IL-6 含量、Beclin1 蛋白表达水平和 LC3-II/ I 比 值降低(P<0. 05),细胞增殖率、IL-10 含量、AKT、mTOR 蛋白磷酸化水平升高(P<0. 05)。 与 pcDNA-NC 组相比, pcDNA-PI3K 组细胞凋亡率、IL-6 含量、Beclin1 蛋白表达水平和 LC3-II/ I 比值降低(P<0. 05),PI3K 蛋白表达水平、 细胞增殖率、IL-10 含量、AKT、mTOR 蛋白磷酸化水平升高(P<0. 05)。 

结论 在SP诱导 HPAEpiC 损伤过程中, miR-27a 能够靶向抑制 PI3K/ AKT/ mTOR 信号通路,促进自噬,而抑制 miR-27a 可激活 PI3K/ AKT/ mTOR 信号通路, 抑制自噬,缓解 SP 所致 HPAEpiC 损伤。 

阅读原文：miR-27a调控PI3KAKTmTOR通路介导的自噬对肺炎链球菌诱导人肺泡上皮细胞损伤的影响.pdf