【操作步骤】家兔，体重2kg左右，麻醉处死，在无菌条件下，于口腔黏膜下注射生理盐水，然后将黏膜剥离，用生理盐水冲洗干净，放入0.1mol/L、pH7.4的磷酸缓冲液中，保存于低温冰箱(－70℃)内备用。使用时将上述家兔口腔黏膜在无菌条件下剪碎，研磨成极细的糊状，加入磷酸缓冲液制成组织匀浆，加入1：1000乙酸硫汞钠溶液防污染。在免疫动物时再加等量的弗氏完全佐剂。

将试验家兔背部除毛，常规消毒，将上述抗原加佐剂的乳化液1ml注入家兔脊柱两侧皮内，共注射20点，每隔2周注射1次，共注射4次。在第4次免疫后10d，分别自兔的耳缘静脉采血，以补体结合试验法进行抗体效价的测定。在免疫注射后5个月再采第2次抗体效价测定。实验动物免疫注射后观察5个月，并将试验兔口腔黏膜出现的溃疡进行活体组织检查。最后以空气栓塞法将动物处死，做尸体消化道组织学检查。

【结果分析】实验兔免疫注射后，经过5个月的观察，每只实验兔多次出现了口腔溃疡，最少者出现4次，最多者出现15次，平均每只兔出现8次左右。实验兔从第3次免疫注射后即开始出现溃疡，在免疫注射4次后的1～2个月内出现溃疡频数达到高峰，在免疫注射后第3～4个月出现溃疡次数逐渐减少。实验兔开始出现口腔黏膜溃疡，以后反复发生。表现为在局限性充血或不充血的口腔黏膜上出现溃疡，经观察溃疡区有丘疹上皮坏死形成，未见疱疹发生。溃疡为针头至小米粒大小，少数可达小豆粒大(直径一般为1～2mm)，圆形或椭圆形，边缘较整齐，溃疡较浅，表面覆有一层灰黄色膜。溃疡一般持续2～3d即愈合，溃疡多发生于唇黏膜，少数可发生在口底，个别溃疡发生于牙龈及上颚部，溃疡多为单个发生。于第4次免疫注射后第10d，分别由兔耳缘静脉采血测定抗体效价，可达1：2000以上，直到免疫注射后第5个月末，口腔黏膜溃疡已经很少出现时，抗体效价降为1：40～1：160。

肉眼观察见食管、胃、十二指肠皆无异常改变；镜下观察食管、胃、十二指肠亦无异常改变。镜下观察可见口腔黏膜上皮坏死、脱落，形成溃疡，其表面被覆大量中性粒细胞和纤维素等渗出物。溃疡底部小血管扩张充血，组织水肿，大量中性粒细胞、淋巴细胞、单核细胞浸润。溃疡四周的黏膜上皮可见鳞状上皮细胞空泡变性，上皮细胞间可见少数中性粒细胞、淋巴细胞、单核细胞浸润。上皮下小血管扩张充血，组织水肿，可见少数中性粒细胞、淋巴细胞、单核细胞浸润。

【注意事项】本试验诱发的口腔溃疡其出现程度与抗体效价的高低是平行一致的。诱发的复发性口腔黏膜溃疡从临床症状表现到组织病理改变，都与人类的复发性口腔黏膜溃疡相似。建立实验动物的复发性口腔溃疡(RAU)模型对于研究人类复发性口腔溃疡意义重大，由于对RAU的病因学认识不足，因而目前临床上尚无治疗RAU的特效药物及方法。利用兔口腔黏膜蛋白作为抗原，可引起实验家兔发生RAU，其临床表现及组织学检查均与人类RAU相似，表明此动物模型可作为研究人类RAU的模型。