目的 比较细菌人工染色体（bacterial artificial chromosome，BAC）转基因小鼠研制中的几个关键因素如实验小鼠遗传背景、BAC质粒注射浓度、BAC质粒片段大小和BAC注射液存放时间等，优化BAC转基因小鼠研制技术。

方法 采用相同的BAC DNA制备方法，分别选取C57BL/6J（B6）和FVB/N 两种实验小鼠，用质量浓度分别为 0.75、1.0、1.5 和 2.0 ng/µL 的 BAC 注射液进行胚胎显微注射，分析不同BAC DNA片段大小和BAC载体DNA制备后至注射前的时间长度，比较小鼠出生率、转基因小鼠阳性率。

结果 用FVB/N为背景的转基因小鼠阳性率较用C57BL/6J高（P＜0.05）。4个BAC质粒注射质量浓度对应的C57BL/6J和FVB/N仔鼠出生率由高到低排序依次为0.75 ng/µL组>1.5 ng/µL组 >1.0 ng/µL组>2.0 ng/µL组。4个BAC质粒质量浓度注射时，C57BL/6J转基因小鼠阳性率由高到低排序依次为 1.5 ng/µL>1.0 ng/µL>2.0 ng/µL=0.75 ng/µL，FVB/N 转基因小鼠阳性率由高到低排序依次为1.5 ng/µL>1.0 ng/µL>2.0 ng/µL>0.75 ng/µL。当 BAC 片段大小为 197 kb 时，仔鼠出生率最高，为 （22.49±9.41）%；片段大小为99 kb时仔鼠出生率最低，为（13.61±15.65）%；当BAC片段为197 kb时，转基因小鼠阳性率最高，为（13.56±12.88）%，极显著高于114 kb（P＜0.01），显著高于99 kb（P＜0.05）。BAC注射液的存放时间与转基因小鼠阳性率并不呈线性关系。

结论 相较于C57BL/6J，FVB/N背景更适于BAC 转基因小鼠的研制。BAC 注射液质量浓度为 1.5 ng/µL 时，阳性转基因小鼠的制备效率最高。BAC片段大小并非阳性转基因小鼠的限制因素。BAC载体DNA制备后1周内完成注射的效果最佳。

阅读原文：影响细菌人工染色体转基因小鼠制备效率的因素分析.pdf