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模型制备

大鼠颈部异位移植心脏心肌梗死模型

2022年01月17日 浏览量: 评论(0) 来源:《常用医药研究动物模型》 作者:主编 苗明三 朱飞鹏 责任编辑:yjcadmin

1.造模材料  动物:健康雄性近交系Lewis大鼠,体重250~300g,鼠龄8~10周;药物:麻醉剂。

2.造模方法  供受者Lewis大鼠均肌内注射速眠新(8ml/kg)全身麻醉,固定四肢使其呈伸展仰卧位,受者颈部及供体胸腹部剃毛后75%乙醇消毒,供受者手术交叉进行,1人完成。①受者准备:受体头对向术者,其上门齿用一橡皮筋拉伸固定;自下颏中至右锁骨中心作一皮肤切口,自锁骨处游离右颈外静脉至其分叉处,沿途各细小属支均用笔式电灼器离断;切断右胸锁乳突肌以暴露右颈总动脉,游离右颈总动脉后,于其近心端夹上一无创伤性显微血管夹,近颅端结扎,显微剪刀做一长约5mm的直切口,肝素生理盐水冲洗血管腔;于右颈外静脉靠近锁骨处夹上一无创伤显微血管夹,结扎切断颈外静脉远心端分叉处,肝素生理盐水冲洗血管腔;②供者手术:正中线剪开腹壁打开腹腔,自下腔静脉注入肝素生理盐水(125U/ml)5ml;左侧第3、4肋间剪开皮肤,打开胸腔,暴露出左室游离壁;将放在液氮中预冷的不锈钢棒取出,直接接触左室游离壁20s;横断腹主动脉与下腔静脉放血,沿双侧腋前线从肋骨至锁骨完全敞开两侧胸腔;以0~4℃平衡盐溶液不断浇注心脏表面;紧靠右心房结扎切断下腔静脉和右上腔静脉,结扎右上腔静脉的同时扎住一半右心耳;游离胸主动脉和肺动脉,于主动脉分叉远端约5mm结扎切断无名动脉,使其形成一段盲管。于无名动脉开口处远端约5mm切断主动脉,肺动脉分叉处切断主肺动脉;提起心脏,用5-0丝线将左上腔静脉及所有的肺静脉集束结扎,同时结扎一半左心耳,于结扎的远心端离断,取出的供心浸于0~4℃肝素生理盐水中,略加修剪后备用;③受者颈部异位心脏移植:取出供心用湿纱布包绕(用0~4℃平衡盐溶液间断浇注),于10倍镜下用10-0无损伤血管缝线行供心主动脉与受体右颈总动脉的单线连续端侧吻合,针距和边距约为0.5mm;用9-0无损伤血管缝线行供心主肺动脉与受体右颈外静脉的单线连续端端吻合,针距约为0.8mm、边距约为0.5mm;吻合完毕后,去除供心外纱布,吻合口周围放置少许明胶海绵;依次开放颈外静脉及颈总动脉血流,如有出血可在吻合口周围稍作压迫;2min内即可看见到供心由纤颤转为规律复跳,心脏正常区域色泽红润,冷冻区呈灰色,1-0丝线单层关闭切口;④术后观察处理:注意保温,单笼饲养,每日观察大鼠精神状态,通过视诊和触诊观察移植心脏的搏动情况。

3.造模原理  颈部异位移植心脏,采用快速冷冻法制备心肌梗死模型。

4.造模后变化  整个手术时间约为1.5~2h,供心冷缺血时间约45~65min,术中可见供体心脏与冷冻钢棒的接触面形成边界清楚的白色圆盘形硬斑。血流开放后94%的移植心脏复跳(冷冻区运动功能障碍),76%的移植心脏跳动达到7天。

5.造模后病理变化  术后1天,镜下可见冷冻损伤区域心肌细胞明显肿胀,细胞质嗜酸性染色增强;心肌纤维断裂,横纹模糊不清,心肌纤维呈波浪状改变;损伤区域内有淋巴细胞及中性粒细胞浸润,并与正常心肌组织界线较为清楚。

6.注意事项  供心切取过程中,分离主动脉和肺动脉的间隔及动脉韧带时,防止误伤肺动脉壁;在推注肝素盐水过程中应避免空气推入,配置好的肝素盐水应置于4℃冰箱保存备用,这样既可起到抗凝作用,又可降低供心的温度;供心的降温对血流恢复后的心脏复跳及移植心脏长期存活有着非常重要的意义,因此在供心切取及血管吻合过程中,必须间断的用冰平衡液浇注心脏;供心需保留一段无名动脉,结扎形成一段盲管,为后续实验进行冠状动脉细胞移植提供简易而安全的路径。


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