【操作步骤】芙蓉鸭幼鸭出壳24h内自胫静脉采血分离血清，经斑点酶免疫分析(DotEIA)法检测鸭乙型肝炎病毒(DHBV)表面及前表面抗原(DHBs/presAg)，DNA斑点杂交检测DHBV DNA，筛选DHBV两者均为阴性的幼鸭用于实验。分别于出壳1d、10d以及28d腹腔接种DHBV阳性血清，1d龄及10d龄鸭的病毒接种量分别为100μl，28d龄鸭为10μl，病毒拷贝数7.8×10的8次方 copies/ml。感染后，每2周采血分离血清检测DHBs/presAg及 DHBV DNA。

分别从DHBV阳性鸭血清及肝组织中提出DHBs/presAg及甲、乙型肝炎病毒核心抗原(DHBcAg)，取上述纯化的DHBs/ presAg、DHBcAg各100μl灭活，与完全佐剂乳化后，待鸭长至8周后(各系统发育成熟)皮下分多点免疫，每隔3周1次，连续免疫5次。

【结果分析】1d龄鸭感染2周后两者(DFIBs/presAg、DHBc Ag)阳性率均为89％左右，4周后达94％左右。连续观察22周保持阳性率不变。10d龄鸭感染2周后阳性率仅为16％左右，4周后为38％左右，6周达61.1％，12周后50％鸭DHBs/presAg及 DHBV DNA转阴，并出现相应的病毒特异性体液及细胞免疫应答。28d龄鸭病毒接种量为1d龄鸭的100倍，观察8周后无1只为阳性。表明通过腹腔接种感染途径，仅1d龄感染鸭可导致持续性DHBv感染。

【注意事项】ABSL-2实验室内进行，加个人防护。