支原体简介

支原体是一类简单的原核生物，大小介于病毒和细菌之间，约0.1-0.6um，能通过除菌滤器，没有细胞壁，仅有三层结构且富含胆固醇的细胞膜。目前被正式命名的支原体就有一百多种，且分布广泛，但其中大多数都不具有致病性。大多数支原体都具有种属特异性，例如猪肺炎支原体仅对猪有致病性，牛支原体仅对牛有致病性。

支原体附着于细胞膜表面，可以释放有毒代谢物，使宿主细胞受损；也可产生广泛的异常免疫反应，造成组织损伤；还可引起细胞免疫功能下降，从而影响宿主健康，干扰试验数据。因此，国内外啮齿类实验动物生产和使用单位、行业团体、各类标准都将（特定的）支原体列为必须排除的病原体。

目前，我国国标GB 14922.2 实验动物微生物学等级监测标准中要求大小鼠应排除支原体（Microplasma spp），国外主要实验动物供应企业和FELASA等机构要求大小鼠应排除肺支原体（M. pulmonis）。

实验动物相关支原体

尽管支原体种类繁多，但目前已知和实验动物相关的支原体种类只有十几种，详见下表。

除上表所列支原体外，还有一类支原体也可感染多种实验动物，即嗜血支原体，但由于篇幅限制，本文不做介绍。

实验鼠相关支原体

目前确认可感染实验啮齿类动物的支原体有五种，分别是肺支原体（M. pulmonis）, 关节炎支原体 (M. arthritidis) , 溶神经支原体 (M. neurolytium) , 鼠支原体 (M. muris) 和希尔氏支原体 (M. collis)。

其中肺支原体（M. pulmonis）最为常见，通常定植于小鼠、大鼠的呼吸道、泌尿生殖道、消化道黏膜表面，感染大多数情况下是慢性的，没有症状或症状很轻微，但偶尔也会导致动物出现呼吸道支原体病、化脓性鼻炎、中耳炎、慢性肺炎等。

此外，仓鼠、豚鼠和家兔中也可分离到肺支原体。肺支原体感染还可导致动物对其他病原体对易感性增加，感染严重程度增加等。

肺支原体主要通过呼吸道和生殖道传播，大鼠的胎儿也可在子宫内感染。

需要注意的是，尽管肺支原体和感染人的肺炎支原体（M. pneumoniae）只有一字之差，但它们不是同一种，肺支原体不会感染人。

关节炎支原体(M. arthritidis)可自然感染大鼠和小鼠，其毒力似乎较低，感染的动物只有极少数会表现临床症状并发展为多发性关节炎。

早期的典型病变是关节充血、水肿，最常发生感染的是跗关节和腕关节，患病动物可出现跛行和行走困难。

病原不仅可从感染动物的关节处分离到，也可从中耳、咽部、生殖器、消化道、哈氏腺、结膜等处分离到。肺支原体和关节炎支原体都可污染供移植的肿瘤。

溶神经支原体(M. neurolytium)在小鼠中很少自然流行，其对青霉素敏感，可产生外毒素。

在静脉内接种溶神经支原体的外毒素后，1小时内就会出现临床体征，头部痉挛性伸展过度，举起一前肢，随后沿躯体长轴发生间歇性旋转, 所以又叫“转圈病”。在旋转1 -2 小时之后，变得昏迷不醒，通常在4 小时内死亡。

溶神经支原体外毒素可通过血管系统破坏血脑屏障，固定在神经胶质细胞受体上。被感染动物如果急性死亡，病变通常不显著，但如果感染后存活8小时以上，会出现星形细胞内液体聚集，发生海绵状变性，20小时后神经组织会呈现空泡化。因此，可通过特征性临床表现如星形细胞肿胀或检测到病原作出诊断。

鼠支原体（M. muris）和希尔氏支原体(M. collis)较少见，尚不清楚前者与哪种疾病相关，后者可导致动物结膜炎。

支原体的检测

01 培养法

由于支原体基因组较小，合成代谢能力十分有限，营养物质需要依靠外界获得，因此在体外培养时除了基础营养物质外还要加入10-20%人或动物血清以提供所需的胆固醇。

可以用缓冲盐溶液或液体培养基冲洗气管、咽喉和鼻道后取样培养，如果发生生殖道、中耳或其他部位的感染也可用相应感染病灶的样本进行培养。

在条件适宜的情况下，可形成典型的“荷包蛋”样菌落。

但培养法的敏感性较低，特别是感染菌量少的样本，更不容易通过培养法检出，而且由于培养过程耗时长、成本高，因此实际应用较少。

02 血清学实验

ELISA和 IFA方法都是常用的支原体抗体检测方法，特别是ELISA方法，由于其检测通量高，敏感性和特异性相对较好，是最常用的方法。

但漏检的情况也时有发生，有文献报道，子宫感染肺支原体的动物ELISA检测结果为阴性；2-4月龄的小鼠也有ELISA漏检的情况发生。

此外，还应评估和考虑与同宿主其他支原体的交叉反应，例如，肺支原体抗原可与关节炎支原体及鼠支原体都可发生交叉反应。

03 核酸检测

PCR方法目前也普遍应用于支原体的检测，且可以很好的对不同种类支原体进行分型鉴定。

但需要注意的是，在使用PCR方法检测时应该谨慎地评估和验证所选择的引物，避免出现非特异性检出。

支原体的防治

任何传染性疾病都应坚守防重于治的原则，对采购的动物和已经在设施内饲养的动物应制定有效的监测计划，定期检测，及时发现潜在的感染。如果发现阳性动物则应及时采取隔离措施，避免感染范围的进一步扩大。

另外，细胞系、肿瘤组织中的支原体污染率较高，因此应谨慎检测每一批进入动物设施的生物制品。

对于啮齿类实验动物，剖腹产能消除感染，但必须对胎膜和子代进行检测确认没有发生子宫内感染。

参考文献

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