目的 在特发性膜性肾病(IMN)中探究转录共激活因子 Yes 相关蛋白(YAP)的表达及其在膜攻击复合物 C5b-9 诱导足细胞损伤的作用。 

方法 免疫组织化学染色检测 YAP 蛋白在 IMN 患者肾组织及正常对照肾组织中的表达;选用亚溶解剂量的膜攻击复合物 C5b-9(以下简称 C5b-9)在体外建立人足细胞系 MPC5 的损伤模型,Western blot 检测随 C5b-9 刺激时间的延长,足细胞中 YAP 蛋白的表达变化;使用 siRNA 瞬时转染技术,靶向沉默足细胞中 YAP 基因表达,qRT-PCR 及 Western blot 检测转染效率;按足细胞处理的不同将其分为 4 组,正常培养的 Control 组,经 C5b-9 处理的 C5b-9 组,C5b-9 处理转染 si-NC 或 si-YAP 的的 C5b-9+si-NC 组与 C5b-9+si-YAP 组; 应用 CCK-8 实验检测上述各组细胞的增殖活力,Anenxin V-FITC 双染色联合流式细胞数检测各组细胞的凋亡发生率,DCFH-DA 法检测细胞中活性氧(ROS)含量,Western blot 检测各组细胞中足细胞标志性蛋白 Nephrin、WT1 与紧 密连接蛋白 ZO-1、表型转换蛋白 Snail 及纤连蛋白 Fibronectin 的蛋白表达水平。 

结果 与正常对照肾组织相比, YAP 在 IMN 中的表达显著增加(P<0. 05);随 C5b-9 刺激时间的延长,足细胞中 YAP 蛋白的表达水平逐渐升高;转染 si-YAP 后,足细胞中 YAP mRNA 及蛋白水平均显著降低(P<0. 05);与 Control 组相比,C5b-9 组、C5b-9+si-NC 组 及 C5b-9+si-YAP 组细胞的增殖活力均显著降低(P<0. 05),而凋亡率及 ROS 含量均显著增加(P<0. 05);但与C5b-9 组或 C5b-9+si-NC 组相比,C5b-9+si-YAP 组细胞增殖活力显著增加(P<0. 05),凋亡率及 ROS 含量显著减少(P< 0. 05);Western blot 检测各组细胞中相关蛋白的表达结果显示,与 Control 组相比,C5b-9 组、C5b-9+si-NC 组及 C5b- 9+si-YAP 组细胞中 Nephrin、WT1 及 ZO-1 蛋白表达均显著降低(P<0. 05),Snail 与 Fibronectin 蛋白表达均显著增加 (P<0. 05);而与 C5b-9 组或 C5b-9+si-NC 组相比,C5b-9+si-YAP 组细胞中 Nephrin、WT1 及 ZO-1 蛋白表达显著增加 (P<0. 05),而 Snail 与 Fibronectin 蛋白表达显著减少(P<0. 05)。 

结论 本研究结果表明 YAP 蛋白在 IMN 患者肾小球中的表达显著增加,而沉默足细胞中 YAP 基因表达能够明显改善 C5b-9 诱导的细胞功能损伤,并抑制其凋亡 的发生。 

阅读原文：YAP在特发性膜性肾病中的表达及其对C5b-9诱导足细胞损伤的作用.pdf