目的 基于miR-34a/沉默信息调节因子1(SIRT1)轴探讨柚皮素对 H2O2 诱导的人视网膜色素上皮细胞(RPE)氧化损伤的保护作用。 

方法 MTT 法检测不同浓度的柚皮素对 H2O2 诱导的人视网膜色素上皮细胞 ARPE-19 存活率的影响以选取适宜柚皮素浓度为后续实验浓度。 取对数期生长的 ARPE-19 细胞分为对照组、 H2O2 组(200 μmol / L)、20 μg / mL 柚皮素组、20 μg / mL 柚皮素+mimics NC 组、20 μg / mL 柚皮素+miR-34a mimics 组。 采用 RT-qPCR 检测细胞中 miR-34a 和 SIRT1 mRNA 的表达,MTT 法及 Annexin V-FITC/ PI 双染分别检测细胞存活与凋亡情况,荧光探针检测细胞内 ROS 水平,生化法检测 SOD 活性、MDA 和 GSH 水平,并采用 JC-1 法检测线 粒体膜电位(MMP),Western blot 检测 SIRT1 及 Bcl-2、Bax、Caspase-3 蛋白表达。 

结果 与对照组相比,H2O2 组 ARPE-19 细胞中 miR-34a 表达、ARPE-19 细胞凋亡率、ROS、MDA 含量、Bax 和 Caspase-3 表达显著升高(P<0. 05), SIRT1 mRNA 表达、ARPE-19 细胞存活率、SOD、GSH 含量、MMP 水平、SIRT1 和 Bcl-2 表达显著降低(P<0. 05);与 H2O2 相比,柚皮素可改善 H2O2 诱导的 ARPE-19 细胞损伤,下调 miR-34a 表达,降低 ROS、MDA、Bax 和 Caspase-3 含量(P<0. 05),上调 SIRT1、MMP、Bcl-2 表达,增加 GSH、SOD 活性(P<0. 05);上调 ARPE-19 细胞 miR-34a 的表达, 可逆转柚皮素对 H2O2 诱导的 RPE 细胞氧化损伤的保护作用。 

结论 柚皮素可能通过下调 miR-34a,促进 SIRT1 的表达,抑制 RPE 细胞凋亡,保护 H2O2 诱导的 RPE 细胞氧化损伤。 

阅读原文：基于miR-34aSIRT1轴研究柚皮素对H2O2诱导的人视网膜色素上皮细胞氧化损伤的保护作用.pdf