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MOG诱导的慢性EAE模型
2022年09月01日
来源:《眼科实验动物学》
作者:魏世辉、王志军 主编
责任编辑:yjcadmin
(1)实验动物:8~10周龄BN大鼠;重组鼠髓鞘少突细胞糖蛋白(Recombinant rat MOG,rrMOGIgd)。
将50μg rrMOGIgd溶于100μl的磷酸盐缓冲液(PBS)后再与100μl CFA(其中灭活结核杆菌为200μg)混合制成乳剂,于鼠尾根部皮下注射。免疫后的第10天开始发病。
(2)实验动物:C57BL/6小鼠,雌性,8~10周龄。
①MOG35~55 MOG是EAE脱髓鞘病变过程中致敏抗体的主要目标,人工合成MOG35~55肽片段代表了的免疫显性区域。
②免疫方法。将300μg MOG35~55溶于200μl PBS液再与200μl CFA混合,添加结核杆菌使其终浓度为2mg/ml,用电子搅拌棒冰浴下搅拌5~10min达到充分乳化。最终需鉴定是否乳化完全,方法是将1滴乳剂滴入水中,如不散开漂在水面则为乳化完全;如立即散开,则未乳化充分。尽量在避光、低温、无菌条件下操作。EAE组双侧腹壁分4点皮下注射混合乳剂,对照组直接将200μl PBS液和200μl CFA充分乳化后分双侧腹壁分4点皮下注射。2组均于免疫前24h和免疫后24h每只小鼠腹腔注射100μl百日咳菌液(含活菌2×109个)。或者将MOG35~55的剂量改为200μg,腹腔注射400ng的百日咳毒素,免疫方法同上。
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