EV71动物模型的制备
1.灌胃感染7日龄ICR小鼠模型
(1)实验动物和实验环境:7日龄SPF级ICR幼鼠,ABSL-3级实验室。
(2)病毒及攻毒途径:C2亚型小鼠适应株,攻毒剂量为5×1000 000pfu只小鼠,灌胃感染。
(3)临床观察和取材:每天观察动物的一般状况,包括皮肤、口、四肢、被毛、活动和精神状况。攻毒后每天称重1次,攻毒后1~5d每天安乐相同数量的小鼠(3~10只),取组织或样本:粪便、血液、小肠、颈髓、胸髓、腰髓、脑干、肌组织、心、肺、肝、脾、肾。同时设立细胞培养上清灌胃感染小鼠做对照,进行大体解剖比较。组织研磨处理后接种RD细胞,每天观察细胞病变,测定组织中病毒效价。
(4)组织病理检查:组织样本经常规病理程序,进行固定,包埋,切片处理后,HE方法染色,镜检观察,或进行免疫组化染色,评价组织中病毒的分布。
(5)结果分析:小鼠在攻毒后3 d开始表现出衰弱、体重下降、后肢瘫痪、并于7~8d后死亡。自第3天开始,小鼠的神经组织、肌肉和血液内均可检测病毒,效价达100pfu/ mg组织以上,其中以肌组织中病毒效价最高。同时,神经组织、肌组织、肝、脾和小肠发生病理改变(图19-5),但在小鼠模型中鲜见神经源性肺水肿和肺出血等病理表现。
2.静脉注射感染猕猴模型
(1)实验动物和实验环境:6~17岁成年雄性猕猴,ABSL-3级实验室。
(2)病毒及攻毒途径:A型临床分离株,攻毒剂量为5×100 000TCID50/只,右胫骨静脉注射感染。
(3)临床观察和取材:每天观察动物的一般状况,包括皮肤、口、四肢、体重、活动和精神状况。攻毒后10d后每天安乐感染动物,取脑和脊髓组织。进行大体解剖比较。组织研磨处理后接种RD细胞,每天观察细胞病变,测定组织中病毒效价。
(4)组织病理检查:组织样本经常规病理程序,镜检观察或进行免疫组化染色,评价组织中病毒的分布。
(5)结果分析:猕猴在攻毒后3d开始表现出震颤和共济失调,不发生皮肤病变和肺水肿症状。病毒主要在猕猴的大脑、小脑和脑干中复制,在心、肝、脾和肾中未分离到病毒。在小脑可观察到炎细胞浸润,脊髓中可见神经元消失和变性。