目的 探讨微小 RNA(miR-488-3p)通过靶向调控 RAS 癌基因家族成员 RAP1A 在同型半胱氨酸介 导肝细胞自噬中的作用。

方法 体外常规培养人正常肝细胞(HL-7702),并给予 100 μmol / L Hcy 干预 24 h,采用 Western blot 检测肝细胞自噬相关蛋白 LC3、p62 和 RAP1A 的表达水平,qRT-PCR 检测肝细胞中 miR-488-3p 和 RAP1A 的表达;转染 miR-488-3p inhibitor 和 mimics 后,qRT-PCR 和 Western blot 分别检测 miR-488-3p 的转染效率 及其对 LC3 和 p62 蛋白表达的影响;TargetScan 预测 miR-488-3p 与 RAP1A 基因相关性,Western blot 检测 miR-488- 3p 下游潜在靶蛋白(RAP1A)的表达改变;Pearson 相关系数对肝细胞中 miR-488-3p 表达水平与自噬相关蛋白水平 进行相关性分析。

结果 与 Control 组相比,Hcy 组肝细胞自噬相关蛋白 LC3、RAP1A 和 miR-488-3p 的表达水平升 高(P<0. 01),而 p62 表达明显降低(P<0. 01);同时,转染 miR-488-3p inhibitor 和 mimics 后,与 NC-inhibitor 组比较, miR-488-3p inhibitor 组中 LC3 和 RAP1A 蛋白的表达水平显著降低(P<0. 01),p62 表达明显升高(P<0. 01);而与 NC-mimics 组相比,miR-488-3p mimics 组中 LC3 和 RAP1A 蛋白表达水平明显增加(P<0. 01),p62 表达降低(P< 0. 01);进一步机制研究表明 RAP1A 是 miR-488-3p 的下游靶基因并受其正向调控。 Pearson 相关性分析发现, miR-488-3p 的表达水平与 LC3( r = 0. 9329,P = 0. 0002)蛋白表达呈正相关,而与 p62( r = -0. 8086,P = 0. 0083)表达 则呈负相关。

结论 miR-488-3p 在 Hcy 介导的肝细胞中高表达,可通过靶向调控 RAP1A 的表达促进肝细胞自噬。

原文内容：miR-488-3p靶向调控RAP1A在同型半胱氨酸介导肝细胞自噬的作用研究.pdf