目的 采用 CRISPR/ Cas9 技术敲除人 LO2 肝细胞系的谷胱甘肽 S-转移酶 Z1(GSTZ1)和延胡索酰 乙酰乙酸水解酶(FAH),探讨 GSTZ1 和 FAH 基因敲除对于肝细胞生长、增殖、迁移的影响。

方法 分别构建靶向 GSTZ1 和 FAH 基因的向导 RNA(sgRNA)载体,与 CRISPR/ Cas9 载体共转染 LO2 细胞,通过有限稀释法筛选,基因 型鉴定和 Western blot 实验证实获得的 FAH 和 GSTZ1 基因的单基因敲除和双基因敲除三种细胞株。 进一步对敲 除细胞株表型进行鉴定,通过平板克隆形成实验检测基因敲除肝细胞克隆形成能力;CCK8 实验和 EdU 分析实验测 试细胞增殖能力;划痕实验检测细胞迁移能力。

结果 成功获得 GSTZ1^{- / -} 、FAH^{- / -}和 FAH^{- / -} / GSTZ1^{- / -}三种基因敲 除细胞株。 相比于野生型细胞,三种细胞株在增殖能力,克隆形成能力、迁移能力均有显著增加,其中 FAH 敲除对 细胞表型的影响相对较小,GSTZ1 敲除对肝细胞活性提高最强,双基因敲除细胞活性处于两个单基因敲除之间。

结论 我们首次成功建立了 FAH/ GSTZ1 双基因突变肝细胞株,为酪氨酸代谢通路研究和Ⅰ型遗传性酪氨酸血症 治疗研究提供了一个新型的细胞模型。

原文内容：FAH/GSTZ1双基因突变肝细胞模型的建立.pdf