目的 利用 CRISPR/ Cas9 系统构建精子特异性磷脂酶 C zeta-1(phospholipase C zeta1,Plcz1)基因敲 除(Plcz1^{- / -} )小鼠模型,探讨 Plcz1 基因在雄性小鼠生育过程中的作用。

方法 选择小鼠 Plcz1 基因第 6、7 外显子作 为靶位点,前后两个位点设计 2 对 sgRNA 序列,再将 2 对 sgRNA 以 Golden Gate 方法插入 pX330A 质粒中,构建 pX330-sgRNA 重组质粒。 经扩增、纯化后,将重组质粒显微注射进小鼠受精卵原核中,进行胚胎移植至代孕母鼠, F0 代小鼠出生后,提取其尾 DNA 进行 PCR 鉴定和 DNA 测序分析。 通过 F0 代与野生型小鼠交配得到 F1 代小鼠, F1 代交配繁殖至 F2 代获得 Plcz1 基因缺失的小鼠纯合品系,Plcz1^{- / -}与野生型小鼠交配,分析 Plcz1^{- / -}雄鼠的生育 能力。

结果 成功构建 pX330-sgRNA 重组质粒,通过繁育和测序筛选获得 3 只 Plcz1^{- / -} 雄鼠( Plcz1^m3 、Plcz1^m4 、 Plcz1^m5 ),对 3 只小鼠进行目的基因测序发现:(1)Plcz1^m3 :Plcz1 基因第 6、7 外显子区域缺失 3078 bp;(2)Plcz1^m4 :第 7 外显子区域缺失 7 bp,该小鼠在饲养过程中死亡;(3)Plcz1^m5 :Plcz1 基因第 6 外显子区域缺失 1 bp。

结论 利用 CRISPR/ Cas9,成功获得 Plcz1^{- / -}雄性小鼠,Plcz1^{- / -}雄性小鼠可育,但与野生型小鼠相比,其生育能力明显下降。

原文内容：基于CRISPRCas9技术构建Plcz1基因敲除小鼠模型.pdf