塞来昔布调节miR-129-5p/HMGB1抑制TNF-α诱导类风湿关节炎成纤维样滑膜细胞炎症因子分泌
目的 探讨塞来昔布对肿瘤坏死因子-α( TNF-α) 诱导类风湿关节炎(RA) 成纤维样滑膜细胞 (FLSs)MH7A 炎症因子分泌的影响及其机制。
方法 以 0、2. 5、5、10、20 和 40 μmol / L 塞来昔布处理 MH7A 细胞 24 h 后,采用噻唑蓝(MTT)法检测细胞活力以筛选无毒性作用浓度;采用酶联免疫吸附测定(ELISA)法、实时荧光 定量 PCR(RT-qPCR)法和 Western blot 法分别检测 2. 5、5、10 μmol / L 塞来昔布处理 TNF-α 诱导的 MH7A 细胞上清 液中炎症因子白细胞介素(IL)-6、IL-1β 水平和微小 RNA(miR)-129-5p 表达水平以及高迁移率族蛋白 1(HMGB1) 表达水平;双荧光素酶报告基因实验检测 miR-129-5p 和 HMGB1 的靶向关系;转染 miR-129-5p mimics 或 HMGB1- siRNA 至 MH7A 细胞中,观察 miR-129-5p 过表达或下调 HMGB1 表达对 TNF-α 诱导的 MH7A 细胞炎症因子分泌的 影响;另外,将 miR-129-5p inhibitor 转染至 TNF-α 诱导的 MH7A 细胞中,观察 miR-129-5p 低表达对 10 μmol / L 塞来 昔布作用下 TNF-α 诱导 MH7A 细胞炎症因子分泌的影响。
结果 与 0 μmol / L 比较,2. 5、5、10 μmol / L 塞来昔布处 理后 MH7A 细胞活性差异无统计学意义(P>0. 05),但 20 和 40 μmol / L 塞来昔布处理后 MH7A 细胞活性明显降低 (P<0. 05)。 在 TNF-α 诱导下,2. 5、5、10 μmol / L 塞来昔布可呈浓度依赖性抑制 MH7A 细胞上清液中 IL-6、IL-1β 水 平和细胞中 HMGB1 蛋白表达并促进 miR-129-5p 表达;miR-129-5p 可与 HMGB1 靶向结合,且 miR-129-5p 可负向调 控 HMGB1 蛋白表达;miR-129-5p 过表达或下调 HMGB1 表达后,TNF-α 诱导的 MH7A 细胞上清液中 IL-6、IL-1β 水 平明显降低(P<0. 05);并且,miR-129-5p 低表达可明显逆转 10 μmol / L 塞来昔布对 TNF-α 诱导的 MH7A 细胞上清 液中 IL-6、IL-1β 水平抑制作用。
结论 塞来昔布可抑制 TNF-α 诱导 MH7A 细胞炎症因子分泌,其作用机制可能与 调控 miR-129-5p / HMGB1 有关。
原文内容:塞来昔布调节miR-129-5p/HMGB1抑制TNF-α诱导类风湿关节炎成纤维样滑膜细胞炎症因子分泌.pdf
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