目的 建立树鼩原代睾丸间质细胞分离培养方法,探究寨卡病毒(Zika virus,Zikv)对该细胞的感染 特性,为 Zikv 感染导致的睾丸损伤及不育提供研究基础。

方法 3 月龄的雄性树鼩 0. 4 mL 3%戊巴比妥钠麻醉处 死后采集睾丸,采用 IV 胶原酶和胰蛋白酶联合消化法获得单细胞悬液,通过 percoll 密度梯度离心结合差异贴壁法 对细胞进行纯化,3β-羟类固醇脱氢酶(3β-HSD)对细胞荧光染色鉴定,ELISA 检测细胞分泌睾酮的能力;用 Zikv 感 染树鼩睾丸间质细胞,并用对寨卡病毒易感的非洲绿猴肾细胞(Vero)作为对比参照,测定感染不同时间点的细胞 及其培养上清液中病毒载量,镜下观察细胞病变,ELISA 检测睾酮含量。

结果 分离培养的睾丸间质细胞经 3β- HSD 鉴定阳性率高达 98%以上,且增殖迅速,能够连续分泌睾酮,第 4 代睾丸间质细胞在 0 ~ 24 h 和 24 ~ 48 h 睾酮 分泌量分别为 1. 253 ng / mL 和 1. 163 ng / mL;用 Zikv 感染树鼩睾丸间质细胞,6 h 内病毒拷贝数可达 2. 15× 10⁵ copies/ mL,且感染 48 h 后基本丧失睾酮分泌能力,感染第 3 天可见明显的细胞病变。

结论 成功建立树鼩睾丸间 质细胞的分离培养方法 ,Zikv 可感染树鼩睾丸间质细胞并能导致该细胞睾酮分泌功能缺失,为 Zikv 入侵生殖系统 机制研究提供基础。 

原文内容：树鼩睾丸间质细胞的分离培养及寨卡病毒感染特性的研究.pdf