目的 探讨 miR-202-5p 对前蛋白转化酶枯草溶菌素 9(PCSK9)的调控作用,及对阿尔茨海默症 (AD)神经元损伤的影响。

方法 SD 大鼠用侧脑室注射 β-淀粉样蛋白(Aβ1-42)法建立 AD 模型,随机分正常对照 组、模型组、ago-miR-202-5p 组、ago-NC 组、PCSK9 抑制剂组。 给药结束后进行空间记忆及学习能力检测;尼氏染色 检测脑皮层组织神经元变化;神经元核抗原(NeuN)免疫荧光染色法检测脑皮层组织神经元数目;ELISA 法检测脑 脊液中 PCSK9、β-淀粉样蛋白 42(Aβ42)、β-淀粉样蛋白 40(Aβ40)、总胆固醇(TC)及脑皮层组织中肿瘤坏死因子- α(TNF-α)、白细胞介素-1β(IL-1β)、磷酸化 Tau 蛋白(P-tau)水平;qRT-PCR 法检测脑皮层组织 miR-202-5p 表达水 平;Western blot 法检测脑皮层组织 PCSK9、LDL 受体相关蛋白 1( LRP-1)、载脂蛋白 E(ApoE) 及淀粉前体蛋白 (APP)、β 位点 APP 剪切酶 1(BACE1)蛋白表达。 双荧光素酶验证 miR-202-5p 对 PCSK9 的靶向调控作用。 建立 体外 AD 细胞模型,共转染 miR-202-5p mimic 及 PCSK9 过表达载体( pcDNA-PCSK9),探究 PCSK9 过表达对 miR- 202-5p 作用的逆转。

结果 与正常对照组相比,模型组大鼠空间记忆及学习能力降低,脑皮质神经元损伤及数目 减少,脑脊液中 PCSK9、Aβ42、Aβ40、胆固醇水平升高,脑皮质组织中 P-tau 及炎症因子水平升高,miR-202-5p 表达 降低,PCSK9 活化介导的 BACE1-APP-Aβ 生成途径活性升高,LRP-1-ApoE 介导的促胆固醇摄取及 Aβ 清除活性降 低(P<0. 05)。 miR-202-5p 过表达或 PCSK9 抑制剂干预治疗,均可抑制 Aβ42、Aβ40 沉积引起的神经元损伤,减少 炎症因子分泌,并抑制 PCSK9 活化介导的 BACE1、APP、Aβ 生成,提高 LRP-1-ApoE 介导的促胆固醇摄取及 Aβ 清 除(P<0. 05)。 miR-202-5p 与 PCSK9 之间存在靶向调控作用。 PCSK9 上调,可部分减弱 miR-202-5p 过表达发挥的 抗 AD 作用(P<0. 05)。

结论 过表达 miR-202-5p 可通过抑制 PCSK9 活化抑制 Aβ 生成并促进 LRP-1-ApoE 介导 的促胆固醇摄取及 Aβ 清除,进而发挥抗 AD 神经损伤作用。

阅读原文：过表达miR-202-5p通过抑制PCSK9减轻阿尔茨海默病神经损伤.pdf