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模型制备

李斯特菌小鼠感染模型制作

2022年12月23日 浏览量: 评论(0) 来源:《常见和新发传染病动物模型》 作者:张连峰 秦川 主编 责任编辑:yjcadmin

能自然感染李斯特菌的动物是建模首选动物,但是由于这些动物存在明显的技术上的限制,即感染后与人李斯特病症状相同的动物并非常见的实验动物(如小鼠或大鼠),而是绵羊、山羊和牛等农场动物。

小鼠对许多人源性李斯特菌的感染并不敏感,并且感染后其急性症状与人感染后不同,所以小鼠并不是李斯特菌的最理想的动物模型,但是鉴于该模型操作方便,并且目前并无更好的替代模型,所以李斯特菌最常见的动物模型仍然是小鼠模型。

1.实验动物  BALB/c鼠,A/J小鼠,C57BL/6,TCR-TG(BALB/c背景)鼠 DO11.10(TCR基因为Vβ812品系),均为雌性,6~8周龄。

2.细菌培养基  100ml中含蛋白胨2g,NaCl 0.5g,葡萄糖0.25g,K2HPO4 0.25g,pH 7.3。

3.病原菌制备及实验动物感染  实验前,用接种针取少许4℃保存的李斯特菌株于5ml培养基中,37℃,摇床培养5h(对数生长期)。用紫外分光光度计测波长为290nm的OD值。菌浓度计算:每0.1个OD290值代表1×10的8次方个细菌。

取1×1000个李斯特菌溶于0.2ml生理盐水中,腹腔注射,感染BALB/c小鼠,并设相应对照,观察感染后小鼠的存活率。

也可采用静脉注射,鼻内注射和经口腔给菌,其中口腔给菌效果较差,因为通过小肠屏障的李斯特菌很少。

4.小鼠李斯特菌模型的指标和结果  2003年以前,普遍的研究证明小鼠经胃感染李斯特菌不敏感,一般采用经腹腔注射的方法。Czuprynski等的研究发现,A/J小鼠经胃填饲的方式对李斯特菌易感,C57BL/6小鼠经胃途径对李斯特不易感。由于经胃感染途径操作简单易行,且对小鼠的伤害小,因此,现在越来越多的研究采用经胃途径感染李斯特菌。

10的8次方cfu的李斯特菌(Scott A)经胃感染C57BL/6,A/J和ICR后,从感染小鼠的肝脾菌落计数看,C57BL/6的系统病变最轻,ICR次之,A/J小鼠最重(图22-3)。而1000 000cfu的李斯特菌经胃感染C57BL/6,A/J和ICR后,比较感染小鼠的肝脾菌落数,A/J小鼠的病变明显比C57BL/6和ICR重(图22-4)。感染72小时内,李斯特菌更容易穿过A/J小鼠的肠胃到达盲肠、肝和脾(图22-5)。A/J小鼠感染后脾脏生发中心被破坏,并有大量的中性粒细胞和巨噬细胞浸润;肝内有灶状坏死,并有大量中性粒细胞和巨噬细胞浸润(图22-6)。 C57BL/6小鼠肝脾无病变。


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