目的 探究过表达 microRNA-26a(miR-26a)的大鼠表皮干细胞(EPSC)来源外泌体(Exos)对深Ⅱ度 烧伤大鼠创面愈合的影响。

方法 体外培养大鼠 EPSC,用携带 miR-26a-绿色荧光蛋白(GFP)的慢病毒颗粒和阴 性对照(NC-GFP)转染以上调 miR-26a 表达,并从未转染的 EPSC、NC-GFP 转染的 EPSC 或 miR-26a-GFP 转染的 EPSC 中分离 Exos,透射电子显微镜(TEM)和纳米粒子追踪分析(NTA)观察 Exos 形态和大小,蛋白质印迹(Western blot)检测 Exos 表面标志物 CD9、CD63 和 CD81 的表达,实时荧光定量聚合酶链反应(RT-qPCR) 检测 EPSC 及 EPSC-Exos 中 miR-26a 表达,CCK-8 法检测 EPSC 的增殖活性;小管形成实验评估 miR-26a-EPSC-Exos 对血管生成的 影响。 建立大鼠深Ⅱ度烧伤模型,分为对照组(control 组)、NC-EPSC-Exos 组和 miR-26a-EPSC-Exos 组,每组 30 只。 NC-EPSC-Exos 组和 miR-26a-EPSC-Exos 组大鼠给予相应的 Exos 干预,control 组大鼠给予等体积的 PBS,每周 1 次, 持续 3 周。 分别在烧伤后第 7、14 和 21 天,观察各组大鼠烧伤创面状况,计算创面愈合率;HE 染色观察创面组织病 理学变化,并进行组织学评分;免疫组织化学法检测创面 CD31 阳性表达,计算微血管密度(MVD)。

结果 miR- 26a 转染可显著升高 EPSC 及其 Exos 中 miR-26a 表达,促进 EPSC 细胞增殖(P<0. 05);TEM 和 NTA 分析结果显示, Exos 呈球形,直径范围在 40~ 150 nm,CD9、CD63 和 CD81 均呈阳性;小管形成实验结果显示,miR-26a-EPSC-Exos 可显著增加管长度,促进内皮细胞血管生成(P<0. 05)。 体内动物实验结果显示,miR-26a-EPSC-Exos 可显著加速 深Ⅱ度烧伤大鼠创面愈合和修复,增加组织学评分和 MVD(P<0. 05)。

结论 过表达 miR-26a 的 EPSC-Exos 可促 进深Ⅱ度烧伤大鼠创面愈合。

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