Olivier等于2007年使用5周龄C57BL/6小鼠建立了霍乱弧菌感染模型，并用该模型研究了溶血素在霍乱弧菌感染中的作用。

一、菌种

模型所使用菌株为链霉素抗性的霍乱弧菌。将过夜培养的霍乱弧菌培养物用含有100mg/ml链霉素的LB培养基稀释，然后在30℃培养至对数中期，或者OD600达到0.5左右。收集细菌，用PBS洗涤两次。采用平板涂布法，将菌悬液涂布至LB平板，计算每毫升菌悬液中的cfu。

二、感染方法

4～5周龄SPF级雌性C57BL/6小鼠(BABL/c小鼠亦可)，小鼠自由饮用链霉素溶液(1mg/ml)4～7d。感染的前夜禁食，但不禁水。在感染操作时，小鼠腹腔注射氯胺酮(60～70mg/kg体重)和甲苯噻嗪(12.5mg/kg)麻醉，随后用50μl的8.5％的碳酸氢钠灌胃并立即用22G的灌胃针在胃中注入50μl悬浮在PBS中的细菌悬液。

三、病原检测

分别在感染后的1h、3h、6h、12h、24h、48h和72h处置小鼠，采集小肠、盲肠和大肠。将小肠切为近端、中端和远端三段，然后将所有的器官在PBS中匀浆，梯度稀释之后涂布到LB平板培养，可以形成菌落并计算菌落数。

四、模型鉴定

小鼠感染后，霍乱弧菌在1小时内达到小肠的近端，3h后到达小肠的中端，6h后达到小肠的远端。在感染后的3～6h内，小肠的中端和远端的霍乱弧菌数目达到高峰，超过感染剂量，并在感染后12h达到复制的最高峰。随后，小肠内的霍乱弧菌数目开始降低，数目达到接种量的千分之一，并在72h内维持稳定。

在该模型中，10的8次方的感染剂量可达到100％的致死率，小鼠感染后24h内便开始死亡。然而，当感染剂量降低时，小肠内的细菌在12h内便被清除完全，而盲肠与大肠中的细菌在72h内被清除完全。

10的7次方cfu野生型V.cholerae感染小鼠(非致死量)导致严重的组织坏死。感染后12h取小鼠小肠远端、中段、末端做病理HE染色，可以观察到感染小鼠末端小肠腔内坏死细胞沉积(图25-3)。