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两株CRISPR工程大肠埃希菌在小鼠体内的定植实验研究

2023年01月31日 浏览量: 评论(0) 来源:实验动物与比较医学2022年第6期 作者:任晨吟 高思琦 李浩 唐标 杨华 刘月环 责任编辑:lascn
摘要:利用小鼠对2株大肠埃希菌工程菌Nissle1917和BW25113在肠道的定植能力与定植效率进行评价, 以筛选出肠道定植效率高的菌株,为后续利用成簇的规律性间隔的短回文重复序列 (clustered regularly interspersed short palindromic repeats,CRISPR) 及其相关蛋白 (CRISPR associated protein,Cas) 系统的工程 菌消减体内耐药菌的研究奠定基础。

目的 利用小鼠对2株大肠埃希菌工程菌Nissle1917和BW25113在肠道的定植能力与定植效率进行评价, 以筛选出肠道定植效率高的菌株,为后续利用成簇的规律性间隔的短回文重复序列 (clustered regularly interspersed short palindromic repeats,CRISPR) 及其相关蛋白 (CRISPR associated protein,Cas) 系统的工程 菌消减体内耐药菌的研究奠定基础。

方法 每株工程菌的实验共取70只18~20 g的ICR小鼠,雌雄各半,操作时小 鼠区分性别并随机分为7个处理组,每组10只 (6只实验,4只对照)。实验组灌胃2×1010个工程菌共200 µL,对照 组灌胃等体积的PBS。灌胃后1、3、6、12、24、48、72 h分别取小鼠的肠系膜淋巴结、胃、回盲部、结肠组织及 内容物,分别采用平板划线、荧光镜检和PCR法检测工程菌,比较Nissle1917和BW25113这2菌株在小鼠体内的定 植能力与效率。

结果 灌胃后前6个时段 (1、3、6、12、24、48 h) 中,3种方法检测到2株菌在胃、回盲部、结 肠组织有定植,淋巴结未检到目标菌株;而72 h有且仅有Nissle1917 菌定植于回盲部和结肠组织,Nissle1917 和 BW25113两株菌的定植效率分别为100%和0。

结论 Nissle1917菌定植效率高于BW25113菌,且能较长时间定植于 回盲部和结肠组织,提示其可作为防控耐药基因传播用CRISPR系统的备选载体菌。

阅读原文:两株CRISPR工程大肠埃希菌在小鼠体内的定植实验研究.pdf

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