小鼠莱姆病感染动物模型
1.造模方法 排除特殊病原体感染的3~5周大小的雌性C3H/HeN(C3H)小鼠,在 SPF环境饲养。
伯氏疏螺旋体的N40亚型(此型由Westchester County N.Y.分离而来,并经过在啮齿类动物和兔子实验证实致病性)培养在BSK Ⅱ(Barbour-Stoenner-Kelly Ⅱ)培养基上,温度保持在34℃。当密度达到100 000/ml可进行接种实验。用乙醚麻醉实验小鼠,麻醉后向小鼠的背部接种10 000的N40亚型螺旋体。把螺旋体接种到小鼠身体上后,从小鼠尾静脉抽取血液样本,检测螺旋体感染的情况。在造模的14天时,螺旋体引起的全身中毒症状严重。
2.模型检测方法
(1)酶联免疫吸附实验:用酶联免疫吸附试剂盒(ELISA)检测伯氏疏螺旋体的异抗体,抗体IgM和IgG滴度的变化,以此来鉴定造模情况。伯氏疏螺旋体感染宿主动物后,宿主体内会产生特殊的同种异型性抗体。可以通过检测特异抗体的存在来验证小鼠动物模型是否造模成功。本次ELISA实验采用兔抗小鼠的特异性抗体,检测模型动物体内IgG1、IgG2a、IgG2b抗体。将0.5μg/ml稀释包被后的包被抗体加入到酶标板内,4℃孵育过夜,用含有10%FCS的PBS封闭。两小时后,用PBS冲洗3次,向孔内加入感染病原体14d和60d的动物模型血清,并将血清稀释100~500倍,室温孵育1h。加入特异抗血清抗体,室温孵育1h。PBS冲洗四次后,加入HRP标记的羊抗兔IgG,室温孵育1h。加入过氧化物酶在波长为450nm酶标仪下读数。
(2)组织病理学检测:尸体检测,在实验结束后把感染模型的小鼠用二氧化碳或心脏取血的方法处死,取心脏和后肢相关联的组织(膝盖、踝关节、趾骨)放入含有10%的福尔马林溶液浸泡。关节部位的组织要进行脱钙处理,石蜡包埋,HE染色,用暗视野显微镜法检测查伯氏疏螺旋体。镜下见,伯氏疏螺旋体感染模型中特征性关节炎改变为:关节间隙中有纤维蛋白、白细胞的渗出,关节滑膜细胞脱落、增生肥厚等病变导致关节滑膜增厚。心肌的损伤在模型中表现为:单核细胞、白细胞、浆细胞、中性粒细胞渗出到关节滑膜腔、动脉外膜处,并有炎症细胞集中在心肌和心外膜中。
3.模型特点 小鼠莱姆病感染动物模型是目前最经济、应用最广泛的感染模型。许多品系的小鼠对螺旋体具有一定的敏感性,但由于小鼠不同的遗传背景、感染龄期的影响,感染后的动物模型表现出不同的症状特点。C3H小鼠感染莱姆病螺旋体后,表现出较为严重的关节炎和心肌炎;BALB/c型小鼠病原体感染后,模型动物表现为轻度关节炎症状和严重的心肌症状。可根据不同的实验需要选用不同品系小鼠进行研究。