1.造模方法  选用伯氏螺旋体的B31型培养在BSKⅡ培养基中，温度保持在34℃。将此类型病原体接种到兔子感染模型身上，制造游走性红斑(erythema migrans, EM)典型表现动物模型。选取6～9月龄的雄性新西兰白兔，单独饲养，环境温度控制在18～21℃，实验之前要排除动物其他病原体和莱姆病感染方可用于实验研究。剪去新西兰白兔背部的毛，暴露出背部皮肤。把B31型伯氏螺旋体接种到动物的背部皮下10个部位，每个部位接种0.1ml包括100 000个病原体数和BSKⅡ培养基混合液体。每天检查动物模型红斑出现的情况，在接种13～20d后，出现螺旋体血症，接种部位出现15mm直径的周围鲜红中间灰白的红斑EM。感染后出现关节肿胀，后腿瘸拐现象。

2.模型检测方法

(1)血清学检测：将浓度为1μg/ml重组伯氏螺旋体的OspA抗原100μl加入96孔培养板微孔中，室温过夜。过夜后PBS洗两次，用浓度为0.5％溶于PBS的脱脂奶粉封闭抗原，PBS洗两次，向微孔内加入莱姆病兔模型动物血清100μl(血清与PBS混合比为1：500)，室温下孵育2h后，用PBS洗4次，加入偶联辣根过氧化物酶的山羊抗兔蛋白(抗体稀释为1：5000或1：2000)，用PBS洗4次，加入过氧化物酶显色，孵育30min后，放到波长为405nm下读取OD值。

(2)病原分离培养：在新西兰白兔感染后的19～20d时，用麻醉药使模型动物安乐死，用70％酒精和3％过氧化氢混合溶液消毒接种的背部，在出现红斑的部位取两块4～5 mm大小的皮肤组织、取脑脊液、淋巴结、膝盖周围组织等。将除皮肤以外的组织剪成5 mm大小，然后放入含有5ml的BSKⅡ培养基(培养基中含有100μg/ml磷霉素)，温度保持在34℃。培养30d后暗视野显微镜下检查，发现阳性培养物，模型动物血液培养的结果也呈阳性，结果一致。

(3)RT-PCR检测：新西兰白兔感染伯氏螺旋体后21d的出现红斑皮肤组织，检测病原体的外膜蛋白A(OspA)证实是否体内病原体的存在。将皮肤组织溶于1.2ml TRIzol试剂中，在高速组织匀浆器作用下提取组织中的RNA。针对OspA引物(估计长度为706 bp)，正向测序引物：5'-GTTAGCAGCCTTGACGAGAA-3，反向测序引物：5'-CTGCTGAC- CCCTCTAATTTG-3'。用兔肌动蛋白做内参(估计长度为609bp)，正向测序引物：5'-CT- GAAGAACATCCAACCCTG-3'，反向测序引物：5'-CTGAGAGCACATTGTTAGCA-3'。

3.模型特点  新西兰白兔对伯氏疏螺旋体感染易引起皮肤红斑典型病变，是研究病原体感染引起局部免疫和致病机制首选模型。兔对伯氏疏螺旋体敏感，在接种13～20d后，血清中可以检出病原体，血中出现抗病原体特异性抗体。