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肾原位抑制miR-146b-5p表达改善UUO小鼠肾纤维化

2023年02月22日 浏览量: 评论(0) 来源:中国实验动物学报2022年第7期 作者:谢柯欢 郭怀英 韩壤乐 王丽 责任编辑:lascn
摘要:明确 miR-146b-5p 在小鼠肾纤维化模型中的表达情况,并探讨体内敲低 miR-146b-5p 对小鼠 肾损伤及纤维化的影响。

目的 明确 miR-146b-5p 在小鼠肾纤维化模型中的表达情况,并探讨体内敲低 miR-146b-5p 对小鼠 肾损伤及纤维化的影响。

方法 将 24 只 8 周龄 C57BL/ 6 雄性小鼠随机分为假手术组( sham),UUO 模型组 (UUO),UUO+肾 miR-146b-5p 电转敲低组(UUO-KD),每组 8 只。 Sham 组仅切开皮肤,暴露且游离右侧肾输尿管, 不做结扎或离断处理。 UUO 组,行单侧输尿管梗阻(UUO)动物模型。 UUO-KD 组通过先电转 CRISPR/ RfxCas13 d 质粒于小鼠肾进行特异性 miR-146b-5p 敲低,24 h 后按模型组方法建立 UUO 小鼠模型,7 d 后处死小鼠收集肾标 本。 HE 染色观察肾病理变化,Masson 检测肾间质纤维化程度,免疫组化检测纤维化相关蛋白(α-SMA、FN、Col-1) 表达,Western Blot、Real-time PCR 检测 miR-146b-5p、α-SMA、FN、IL-1β、IL-6、TNF-α 等基因的变化。

结果 miR- 146b-5p 在 UUO 模型中显著升高,电转敲低 miR-146b-5p 后该基因显著下降(P<0. 05),同时,IL-1、IL-6、TNF-α 等 炎性因子表达出现显著下调(P<0. 05)经 HE、Masson 染色后观察到,UUO-KD 组较 UUO 组相比肾结构良好,肾小管 变形轻微,肾损伤及纤维化程度均明显改善。 且免疫组化结果发现:α-SMA、FN、Col-1 等纤维化指标在 UUO-KD 组 也显著降低(P<0. 0001)。

结论 抑制 UUO 中高表达的 miR-146b-5p 可明显改善肾纤维化,miR-146b-5p 可能是肾 纤维化的一个潜在治疗靶标。

阅读原文:肾原位抑制miR-146b-5p表达改善UUO小鼠肾纤维化.pdf

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