目的 观察自噬激活剂———雷帕霉素对缺氧缺糖/ 复氧复糖 HT22 细胞焦亡的影响。
方法 取对数 生长期的 HT22 细胞,随机分为 4 组:正常组、模型组、溶剂对照组、雷帕霉素组,除正常组外,其余各组细胞均进行 缺氧缺糖 6 h、复氧复糖 24 h 处理。 倒置显微镜观察细胞形态,CCK-8 法检测细胞活性,LDH 法检测细胞损伤情况, 免疫荧光染色法观察细胞内 NLRP3 阳性表达,Western blot 法检测细胞内 NLRP3、Cleaved Caspase-1、IL-18、IL-1β 蛋 白表达。
结果 正常组细胞胞体饱满、折光性强,细胞突触较多且相互间连接成网状;模型组及溶剂对照组细胞皱 缩、变圆,大量脱落、漂浮,细胞间连接大幅减少;雷帕霉素组细胞损伤情况较模型组显著缓解。 与正常组比较,模 型组细胞活力显著降低,LDH 漏出率、NIRP3 阳性率、细胞内 NLRP3、Cleaved Caspase-1、IL-18、IL-1β 蛋白表达均显 著升高(P<0. 01);与模型组比较,雷帕霉素组细胞活力显著升高,LDH 漏出率、NIRP3 阳性率、细胞内 NLRP3、 Cleaved Caspase-1、IL-18、IL-1β 蛋白表达均显著降低(P<0. 01)。 溶剂对照组与模型组比较无显著差异(P>0. 05)。
结论 雷帕霉素可能通过抑制细胞焦亡发挥对缺氧缺糖/ 复氧复糖 HT22 细胞的保护作用。