目的 探讨可高效分离小鼠骨髓间充质干细胞（ｍＢＭＳＣｓ）的技术方法。

方法 分别采用骨片消化 爬片法、全骨髓贴壁法、骨片消化液上清法和骨片消化研钵法等四种方法分离 ７ ～ ９ 周龄雄性 Ｃ５７ＢＬ／ ６ 小鼠的 ｍＢＭＳＣｓ；于倒置显微镜下观察原代 ｍＢＭＳＣｓ 形态；运用流式细胞术检测 ｍＢＭＳＣｓ 特征性免疫表型；采用多向分化 诱导检测 ｍＢＭＳＣｓ 成骨分化能力与成脂分化能力。

结果 分离获得的原代细胞首次换液后于倒置显微镜下观察： 骨片消化爬片法分离的细胞，仅见大量骨碎片和杂细胞，该法所分离细胞不再进行后续检测评估；全骨髓贴壁法分 离的细胞，仅可见少量多角形贴壁细胞，夹杂大量杂细胞；骨片消化液上清法分离的细胞也可见较多长梭形、三角 形贴壁细胞，但杂细胞较多；骨片消化研钵法分离的细胞，可见较多长梭形、多角形贴壁细胞，杂细胞少。 分离细胞 经培养传代到第 ３ 代（Ｐ３ 代）时，一方面采用流式细胞术分析 ｍＢＭＳＣｓ 特征性免疫表型，结果表明骨片消化液上清 法和骨片消化研钵法分离的 ｍＢＭＳＣｓ 纯度均较高，全骨髓贴壁法不理想；另一方面，进行成骨分化诱导与成脂分化 诱导，结果表明与全骨髓贴壁法分离的细胞相比，骨片消化液上清法和骨片消化研钵法所分离出的细胞具有较强 的多向分化潜能。

结论 骨片消化液上清法和骨片消化研钵法分离获得的 ｍＢＭＳＣｓ 纯度较高、质量较好。

阅读原文：小鼠骨髓间充质干细胞分离方法的比较与探讨.pdf