干酪乳杆菌细胞壁成分诱发小鼠自身免疫性心肌炎模型

来源:《常见和新发传染病动物模型》 发布时间:2023年06月02日 浏览次数: 【字体: 收藏 打印文章

应用干酪乳杆菌细胞壁成分(lactobacillus casei cell wall extract, LCWE)诱导小鼠自身免疫性心肌炎。

1.免疫原LCWE的的制备  依照Trang等的方法并略作改进,将干菌种接种于培养基中,于37℃温箱中厌氧培养2d后离心(5000r/min,40min),磷酸盐缓冲液(PBS)反复洗涤6次后取沉淀物,加入10倍4%十二烷基硫磺酸钠孵育以溶解细菌(室温,过夜),PBS反复洗涤10次后弃去上清液,取沉淀物依次用250μg/ml DNaseI、RNase、胰蛋白酶孵育(各37℃×4h,PBS洗2次)。弃去上清液,沉淀物湿重约20g,加入60ml PBS,在乙醇浴中用细胞裂解仪超声裂解2h(裂解细胞壁)。然后用超速低温离心机离心(40 000r/min,4℃离心1h),上清液的成分为LCWE。根据酚/硫酸比色计测定鼠李糖浓度,以此鼠李糖浓度值作为LCWE的浓度,然后用PBS稀释至1mg/ml置于-70℃备用。

2.动物  4~5周龄BALB/c小鼠。

3.免疫方法  实验组和对照组分别于0、3d、5d、10d经腹腔皮下注射0.5ml的LCWE和PBS。

4.病理表现  全部实验组小鼠在初次免疫后第14天出现不同程度的心肌炎病理改变,光镜下主要表现为心肌间质淋巴细胞浸润,局灶性心肌坏死和局灶性出血,并同时存在心内膜炎和心外膜炎。电镜下见心肌细胞及线粒体肿胀、肌丝溶解和淋巴细胞浸润。免疫鼠脾脏淋巴细胞升高,血清出现较高滴度的抗心肌抗体。在初次免疫后第28天上述炎症及心肌坏死减轻,脾脏淋巴细胞较前下降,血清抗心肌抗体滴度较前无明显变化。电镜下,实验组小鼠心肌细胞肿胀,肌丝溶解,部分线粒体肿胀,淋巴细胞浸润。对照组小鼠心肌结构正常。

5.优缺点  该模型采用自制的LCWE多次注入易感的BALB/c小鼠腹部皮下,成功地诱导出BALB/c小鼠严重的心肌损害,且心肌炎的发生率为100%。LCWE能够诱导小鼠产生自身免疫性心肌炎,该动物模型病理改变典型,群体发生率高。

Baidu
map