目的 构建并鉴定胸腺上皮细胞( thymic epithelial cells,TECs)特异性敲除 GSK-3β 基因小鼠模型, 评价其免疫学特征。
方法 采用小鼠胚胎干细胞(ES 细胞,embryonic stem cells)打靶基因敲除技术,得到 F0 代的 GSK-3β flox / flox (GSK-3β f/ f )小鼠;再采用 Cre-LoxP 系统进行小鼠的繁殖;PCR 鉴定,筛选出基因型为 GSK-3β f/ f FoxN1- Cre + / - (GSK-3β - / - )小鼠,即为在 TECs 特异性敲除 GSK-3β 基因的小鼠。 观察基因敲除鼠的一般生物学特征、繁殖能 力和子代存活率。 应用 HE 染色、流式细胞术及免疫荧光技术,比较基因敲除鼠和野生型小鼠免疫器官结构、胸腺、 脾及外周血中免疫细胞比例及增殖能力差异。
结果 成功构建 TECs 特异性敲除 GSK-3β 基因小鼠模型。 与野生 型(wild type,WT)小鼠相比,GSK-3β - / -小鼠一般生物学特征无明显差异,子代存活率 > 90%;衰老进程中 GSK-3β - / - 小鼠胸腺比 WT 小鼠体积大,胸腺指数高,胸腺细胞数量多;脾中的初始 T 细胞及近期迁移细胞数量也显著多于 WT 小鼠。
结论 成功构建了 TECs 特异性敲除 GSK-3β 基因小鼠模型。 为研究 GSK-3β 基因在 TECs 的功能和作用 机制提供了很好的研究模型。