目的 建立更准确、灵敏的液相色谱紫外 (liquid chromatography-ultraviolet,LC-UV) 检测大鼠血清尿 酸的方法,并将该方法与市售试剂盒的检测结果进行比较,为氧嗪酸钾诱导的大鼠高尿酸血症模型中血清尿酸含量 的准确测定提供新方法。
方法 采用向SPF级雄性SD大鼠腹腔注射氧嗪酸钾 (300 mg/kg) 的方法建立高尿酸血 症大鼠模型,对照组给予等量的0.5%羧甲基纤维素钠溶液。经眼眶后静脉丛采血,离心获得大鼠血清样品,经 0.1%三氟乙酸-乙腈 (含内标3,4-二羟基苄胺氢溴酸盐) 沉淀后,取上清液进样分析。采用Waters XBridge HILIC 色谱柱 (150 mm×4.6 mm,3.5 μm) 对尿酸进行分离,使用乙腈 (含0.5%甲酸与2 mmol/L甲酸铵) 作为有机相, 甲醇溶液 (甲醇∶水=1∶1,含0.5%甲酸与2 mmol/L甲酸铵) 作为水相,进行等度洗脱,于290 nm波长处进行检 测。使用活性炭处理的血清样品作为空白生物基质,用于方法学验证。分别使用所建立的LC-UV方法与两种市售试 剂盒 (尿酸酶法和磷钨酸法) 检测高尿酸血症模型大鼠的血清尿酸水平,并对3种检测方法的准确度进行比较。
结果 大鼠血清中的尿酸在10~200 μg/mL质量浓度内线性关系良好 (R >0.999),定量下限为10 μg/mL,准确度 为-2.17%~2.21%,批内精密度为 0.52%~1.95%,批间精密度为 3.04%~4.90%,提取回收率为 83.12%~89.91%。 在氧嗪酸钾诱导的大鼠高尿酸血症模型中,市售的磷钨酸法试剂盒测定结果显著高于LC-UV法测定结果,市售的尿 酸酶法试剂盒测定结果显著低于 LC-UV 法测定结果,但 LC-UV 方法的加样回收率结果最佳 (95.90%~99.96%)。
结论 所建立的LC-UV方法能够准确测定大鼠血清中尿酸含量,与市售试剂盒相比具有更高的准确度,推荐作为氧 嗪酸钾诱导的大鼠高尿酸血症模型中血清尿酸含量的检测方法。