目的 探讨熟地黄多糖(RGP)调控长链非编码 RNA(lncRNA)母系表达基因 3(MEG3)对碘乙酸钠 (MIA)诱导的骨关节炎(OA)软骨细胞凋亡的影响。

方法 培养大鼠软骨细胞,不同浓度 MIA(0、1、2、4、8 μmol / L)诱导建立软骨细胞损伤模型,并给予不同浓度 RGP(50、100、200、400、800 mg / mL)处理筛选合适的实验浓度。 实验分为正常组、MIA 组、RGP 组、RGP +si-NC 组、RGP +si-MEG3 组,Cell Counting Kit-8(CCK-8) 检测细胞活力; Hoechst 33258 染色及流式细胞术检测细胞凋亡情况;实时荧光定量 PCR(RT-qPCR)检测细胞中 MEG3、金属蛋白 酶 13(MMP-13)、Ⅱ型胶原 α1(COL2A1)和蛋白聚糖(ACAN)mRNA 水平;蛋白免疫印迹(Western blot)检测细胞中 磷脂酰肌醇 3 激酶( PI3K)、p-PI3K、丝/ 苏氨酸激酶(AKT)、p-AKT、BAX、BCL-2、caspase3 蛋白表达水平。

结果 MIA 以剂量依赖性方式降低软骨细胞活力,诱导细胞凋亡,并降低 MEG3 和 COL2A1 mRNA、ACAN mRNA 水平,升 高 MMP-13 mRNA 水平(P<0. 05)。 100、200、400、800 mg / mL RGP 可升高软骨细胞活力及 MEG3 水平(P<0. 05)。 与正常组相比,MIA 组细胞活力、MEG3、COL2A1 mRNA、ACAN mRNA 和 p-PI3K/ PI3K、p-AKT/ AKT、BCL-2 蛋白水平 降低,细胞凋亡率、MMP-13 mRNA 和 BAX、caspase3 蛋白水平升高(P<0. 05);与 MIA 组相比,RGP 组细胞活力、 MEG3、COL2A1 mRNA、 ACAN mRNA 和 p-PI3K/ PI3K、 p-AKT/ AKT、BCL-2 蛋白水平升高,细胞凋亡率、 MMP-13 mRNA 和 BAX、caspase3 蛋白水平降低(P<0. 05);敲低 MEG3 可减弱 RGP 对 MIA 诱导的软骨细胞损伤的保护作 用。

结论 RGP 可促进软骨细胞 ECM 合成,并抑制细胞凋亡,减轻 MIA 诱导的软骨细胞损伤,其作用机制可能与 上调 MEG3 表达,诱导 PI3K/ AKT 通路活化有关。

阅读原文：熟地黄多糖调控lncRNA MEG3对碘乙酸钠致骨关节炎软骨细胞损伤的保护作用.pdf