Agtr1a调节LPS诱导的Lbp-/-小鼠原代肝细胞炎症

来源:中国实验动物学报2023年第8期 发布时间:2023年10月23日 浏览次数: 【字体: 收藏 打印文章

目的 基于 LBP 敲除小鼠(Lbp - / - )原代肝细胞探讨 LBP 缺失后 Agtr1a 调节 LPS 诱导炎症的作用。

方法 通过两步灌流法提取 WT 组、Lbp - / -组小鼠原代肝细胞,构建 LPS 诱导的原代肝细胞炎症模型;分别采取加 入抑制剂氯沙坦、转染 siRNA 两种方法抑制 Lbp - / -小鼠原代肝细胞 Agtr1a 表达;抑制剂法将细胞分为对照组 A(空 白对照)、LPS 组 A(LPS 刺激)、抑制剂氯沙坦组(氯沙坦干预 3 h 后加入 LPS 刺激),转染 siRNA 法将细胞分为对 照组 B(空白对照)、LPS 组 B(LPS 刺激)、阴性对照组( si⁃NC 干扰 12 h 后加入 LPS 刺激)、干扰组( si⁃agtr1a 干扰 12 h 后加入 LPS 刺激);WT 组小鼠原代肝细胞则分为对照组(空白对照)、LPS 组( LPS 刺激)。 本研究利用 Western Blot 验证 Lbp - / -小鼠原代肝细胞中 LBP 蛋白敲除情况,从 WT 组、Lbp - / -组小鼠原代肝细胞的 Western Blot 方面验证 Agtr1a 在 LPS 刺激下的变化情况,使用 CCK8、qPCR、Western Blot 等方法探讨抑制剂氯沙坦及 si⁃agtr1a 对 Lbp - / -小鼠原代肝细胞炎症的抑制情况。

结果 Lbp - / -小鼠原代肝细胞中 LBP 蛋白已敲除完全;与 WT 组相比,在 LPS 诱导下 Lbp - / -小鼠原代肝细胞 Agtr1a 表达显著升高(P < 0.001);抑制剂组细胞存活率显著升高(P < 0.01); 抑制剂组以及干扰组的炎症因子表达显著降低(P < 0.01),同时与炎症相关蛋白 p⁃ERK 的表达也显著降低(P < 0.01)。

结论 LPS 刺激 Lbp - / -小鼠原代肝细胞后 Agtr1a 表达上调能够代偿脂多糖结合蛋白(LBP)的作用来促进 炎症的发生,抑制 Agtr1a 表达能显著降低 LPS 诱导的 Lbp - / -小鼠原代肝细胞炎症反应。

阅读原文:Agtr1a调节LPS诱导的Lbp-╱-小鼠原代肝细胞炎症.pdf

Baidu
map